[发明专利]核桃青皮中一种达玛烷型三萜化合物的制备方法

说明书

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种从核桃青皮中提取得到的达玛烷型三萜化合物及其制备方法和应用，所述的三萜化合物的分子式为C₃₁H₅₂O₅。本发明提供了该化合物的制备方法包括醇提水沉处理、有机溶剂萃取、正相硅胶柱色谱分离、葡聚糖凝胶柱色谱分离和HPLC制备纯化等步骤；此外，本发明化合物对多种肿瘤细胞，包括人胃癌细胞BGC‑823、人肝癌细胞SMMC‑7721及人结肠癌细胞SW‑480均具有一定的抑制活性，有望进一步开发成为新的抗肿瘤药物。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，更具体地，涉及一种从核桃青皮中分离得到的达玛烷型三萜化合物及其制备方法和在制备抗癌药物上的应用。

背景技术

消化道肿瘤为高发肿瘤，常具有发病隐匿，早期诊断困难等特点。2018年全球癌症统计数据显示，新发肿瘤的发病率及死亡率排名中，结直肠癌、胃癌位居前五。在我国除上述癌症外，肝癌、食道癌等消化道肿瘤危害性也很大。目前主要治疗手段有手术治疗、分子靶向药物治疗、放化疗等，但常常毒副反应比较大；一些中医药特色诊疗，得到越来越多医患的认可。

核桃青皮，又名青龙衣，是鲜核桃外面的肉质果皮。味苦，涩，性平；归肝、脾、胃经。在我国分布广泛，资源丰富。《简明中医词典》记载青核桃酒具有和肠胃，止疼痛的功效。《北京市中草药制剂选编》称青龙衣注射液可以疏肝、解毒。现代研究表明，青龙衣能够通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡发挥抗肿瘤作用，是我国重要的抗肿瘤药源植物。其中，活性成分包括醌类，三萜类、二芳基庚烷类等。在我国不论野生核桃还是种植核桃资源都很丰富，食用核桃时外层青皮常常丢弃造成资源浪费，充分开发和利用核桃青皮，对于抗肿瘤药物的研制开发以及肿瘤治疗具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的是为解决核桃青皮资源丢弃浪费问题，提供一种具有抗肿瘤活性结构新颖的达玛烷型三萜化合物，完善三萜类化合物数据库且为抗肿瘤药物的开发提供原料。

本发明的另一目的是提供上述三萜化合物的制备方法。

本发明的再一目的是提供上述三萜化合物在抗肿瘤方面的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种从核桃青皮中分离得到的具有抗肿瘤活性的达玛烷型三萜化合物，简称胡桃达玛酮A，其化学结构式如下：

分子式为C₃₁H₅₂O₅。

本发明还提供了该达玛烷型三萜化合物的制备方法：依次通过醇提水沉处理、有机溶剂萃取、正相硅胶柱色谱分离、葡聚糖凝胶柱色谱分离和HPLC制备纯化得到。具体制备步骤如下：

（1）醇提水沉处理：新鲜核桃青皮低温烘干，适当粉碎，加入80%乙醇加热回流提取3次，药材重量与乙醇体积比为1:8，将所得提取液合并、浓缩；向上述乙醇浓缩液中加入等体积的纯净水，搅拌均匀，并于10℃下静置12小时，抽滤除去沉淀，滤液浓缩至不含醇；

（2）有机溶剂萃取：将步骤（1）中得到的浓缩液，加入适量的纯净水稀释，再依次用等体积的二氯甲烷、乙酸乙酯对稀释溶液进行反复萃取，合并乙酸乙酯萃取液，浓缩干燥得到乙酸乙酯萃取物；

（3）正相硅胶柱色谱分离：取步骤（2）所得乙酸乙酯萃取物进行正相硅胶柱色谱分离。依次采用体积比为30:1、10:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱，每一个比例洗脱6个柱体积，其中将体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱部分减压回收得到分离产物；

（4）葡聚糖凝胶柱色谱分离：取经步骤（3）中获得的分离产物，通过葡聚糖凝胶柱，以体积比为6:4的甲醇-水为流动相进行等度洗脱。洗脱8个柱体积，弃去前2.5个柱体积洗脱液，收集后面洗脱液，回收溶剂，得粗品；