[发明专利]一种提高免疫组化效率的方法

说明书

本发明公开一种提高免疫组化效率的方法，包括如下步骤：步骤一，切片的制备；步骤二，脱蜡和水化；步骤三，抗原修复；步骤四，冲洗；步骤五，加入一抗；步骤六，封闭；步骤七，加入二抗；步骤八，显色；其中，以上步骤均在电场环境下进行。该方法的特点在于整个免疫组化过程在电场环境下进行，从而实现低环境负荷型微量液滴无损搅拌，进而大幅度降低抗体的使用量，节约成本，更重要的是能大幅度缩短组织免疫诊断的反应时间，甚至可将组织免疫诊断的反应时间由现今177min的水平缩短到19 min，另外该方法还可以用在核酸快速诊断上，将反应时间由现今720min的水平缩短到30 min，极大地提高诊断效率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提高免疫组化效率的方法。

背景技术

免疫组织化学（IHC）是通过化学反应标记抗体的显色剂，利用抗原与抗体特异性结合的原理，定性定量的研究组织或细胞中的未知抗原。近年来，随着免疫组化技术的发展，许多疑难肿瘤得到了明确的诊断。免疫组化技术用于临床切片诊断肿瘤细胞上处于非常重要的地位。我国免疫组化技术是从上个世纪60年代发展起来的，然而，现阶段我国免疫组化用于临床诊断仍然存在许多技术瓶颈，例如，免疫组化所耗费的时间很长，通常情况下，免疫诊断反应需过夜，时间超过24小时，无法达到现场快速检测的目的。

因此大大缩短反应时间尤为重要，如何在不损坏抗原抗体蛋白活性的前提下，提高其反应结合率，减少反应所需时间，依然是现阶段免疫组化技术面临的挑战。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是对以上不足进行了深度改良和机理分析，提供一种提高免疫组化效率的方法，该方法的特点在于整个免疫组化过程在电场环境下进行，从而实现低环境负荷型微量液滴无损搅拌，进而大幅度降低抗体的使用量，节约成本，更重要的是能大幅度缩短组织免疫诊断的反应时间，甚至可将组织免疫诊断的反应时间由现今177min的水平缩短到19 min，另外该方法还可以用在核酸快速诊断上，将反应时间由现今720min的水平缩短到30 min，极大地提高诊断效率。具体技术方案如下：

一种提高免疫组化效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，切片的制备：取组织切片，展片、捞片后固定2min,于低温下保存；

步骤二，脱蜡和水化：将蜡片置于二甲苯中浸泡后，甩去多余液体置于无水乙醇中浸泡，再依次由自来水，PBS溶液冲洗；

步骤三，抗原修复：取配置好的抗原修复液放入抗原修复盒中，液体超过组织切片上边缘0.5cm，盖上盖子锡箔纸外围封盖2min；

步骤四，冲洗：将步骤三中的组织切片用PBS溶液冲洗1min;

步骤五，加入一抗：甩去多余液体后，加入1mg/mL的一抗试剂50uL，室温孵育5min；

步骤六，封闭：加入封闭液封闭1min；

步骤七，加入二抗：甩去多余液体后，加入1mg/mL 的二抗酶标聚合物50μL，室温孵育5min；

步骤八，显色：甩去多余的液体后，加入50uL DAB显色液，室温孵育1min，显微镜下观察染色结果，防止过染，自来水冲洗；

其中，以上步骤均在电场环境下进行。

进一步，步骤一中切片取4um，在45℃展片，于67℃固定2min，保存温度为-20℃。

进一步，步骤二中，于二甲苯中浸泡5s，于无水乙醇中浸泡5s×1次，自来水冲洗30min，PBS溶液冲洗5s×1次，其中PBS溶液为10mM PBS，pH为7.2 。

进一步，步骤三中的抗原修复的温度范围为102-120℃。