[发明专利]一种生物还原马索亚油制备天然丁位癸内酯及丁位十二内酯的方法

权利要求书

1.一种生物还原马索亚油制备天然丁位癸内酯及丁位十二内酯的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）将巴氏酵母Saccharomyces pastorianus OMK-70依次经固体斜面培养基和种子培养基培养后，获得种子培养液；巴氏酵母Saccharomyces pastorianus OMK-70于2019年12月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 20191123；固体斜面培养基的配方按质量百分比包括：蛋白胨0.5-5%，酵母提取物0.1-3%，葡萄糖1-5%，琼脂0.5-5%，溶剂为水；种子培养基的配方按质量百分比包括：蛋白胨0.5-5%，酵母提取物0.1-3%，葡萄糖1-5%，溶剂为水；

（2）将该种子培养液接种于发酵培养基中培养，至菌体生长至对数早期后分批加入马索亚油，并不断流加葡萄糖继续发酵；发酵培养基的配方按质量百分比包括：葡萄糖2.0-5.0%，磷酸二氢铵0.5-1.0%，磷酸二氢钾0.1-0.5%，硫酸镁0.05-0.2%，硫酸钙0.05-0.1%，酵母浸粉0.1-1.0%，溶剂为水；

（3）在步骤（2）所得的培养液中加入乙酸丁酯，充分搅拌反应，静置分层后取上层油相；

（4）回收上述上层油相中的乙酸丁酯后，将所得锅底进行精馏，控制精馏温度，收集不同温度的馏分，即得天然丁位癸内酯及丁位十二内酯。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）菌种活化：从低温保藏的甘油管中划线巴氏酵母Saccharomyces pastorianus OMK-70于固体斜面培养基上，于28 ℃-30 ℃静置培养48-72 h后得到活化菌种；

（2）制备种子培养液：将步骤（1）所得的活化菌种接种于种子培养基中，于28 ℃-30 ℃且200-250 rpm条件下震荡培养至对数早期，即得种子培养液；

（3）发酵及转化：将步骤（2）所得的种子培养液按5-10%的体积比接种于发酵培养基中，于pH4.8-6.4，28 ℃-30 ℃，搅拌转速100-600 rpm，通气量1:0.5的条件下培养6-12 h，至菌体生长至对数早期后分批加入马索亚油，并不断流加葡萄糖继续发酵48-72 h；

（4）萃取：在步骤（3）所得的培养液中按0.8-1.2: 0.8-1.2的体积比加入乙酸丁酯，于30 ℃-40 ℃，200-300 rpm搅拌1-2 h，静置分层后取上层油相；

（5）回收溶剂：将步骤（4）所得的上层油相转移至蒸馏瓶常压回收乙酸丁酯，获得锅底；

（6）精馏：将步骤（5）所得锅底转移至精馏塔进行精馏，控制精馏温度，收集不同温度的馏分，即得天然丁位癸内酯及丁位十二内酯。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述固体斜面培养基的配方按质量百分比为：蛋白胨2.5%，酵母提取物1.5%，葡萄糖2.5%，琼脂1.5%，余量为水。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述种子培养基的配方按质量百分比为：蛋白胨2.5%，酵母提取物1.5%，葡萄糖2.5%，余量为水。

5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述发酵培养基的配方按质量百分比为：葡萄糖2%，磷酸二氢铵1%，磷酸二氢钾0.5%，硫酸镁0.2%，硫酸钙0.1%，酵母浸粉0.5%，余量为水。

6.一种巴氏酵母（Saccharomyces pastorianus）OMK-70，其特征在于：于2019年12月27日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 20191123。

7.权利要求6所述的一种巴氏酵母Saccharomyces pastorianus OMK-70在生物还原马索亚油制备天然丁位癸内酯及丁位十二内酯中的应用。