[发明专利]一种基于激光显微切割技术的骨组织细胞收集方法

权利要求书

1.一种基于激光显微切割技术的骨组织细胞收集方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取样和冰冻切片的制备：将骨组织埋入冰冻包埋介质中，在干冰预冷的己烷中冰冻成块，低温保存；在冷冻包埋的硬组织块上贴上透明支持膜，透明支持膜的粘着面和组织面紧密相贴，在低温恒温器中切片；将带有组织切片的透明支持膜的非粘着面贴在预冷的玻璃载玻片上，低温保存；

(2)固定、染色和脱水：冰冻切片在甲醇固定剂中固定，然后进行染色，再使用70％乙醇洗去多余的染料；进行梯度脱水，最后使用二甲苯透明脱水；

(3)激光显微切割：切片干燥后，将透明支持膜从玻璃载玻片上取下，固定于切片框上，将盛有切片的切片框置于载物台，在紫外光下将目标细胞切割下来。

2.根据权利要求1所述的一种基于激光显微切割技术的骨组织细胞收集方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述低温保存的温度控制为-80℃。

3.根据权利要求2所述的一种基于激光显微切割技术的骨组织细胞收集方法，其特征在于：在步骤(1)中，使用钨钢刀片在-21℃的低温恒温器中切片。

4.根据权利要求3所述的一种基于激光显微切割技术的骨组织细胞收集方法，其特征在于：在步骤(1)中，切片厚度为8μm。

5.根据权利要求4所述的一种基于激光显微切割技术的骨组织细胞收集方法，其特征在于：在步骤(2)中，冰冻切片在甲醇固定剂中固定1分钟。

6.根据权利要求5所述的一种基于激光显微切割技术的骨组织细胞收集方法，其特征在于：在步骤(2)中，染色时，切片水洗后在0.1％甲苯胺兰中染10秒，然后在100％乙醇清洗，最后将二甲苯滴在切片上，室温干燥。

7.根据权利要求5所述的一种基于激光显微切割技术的骨组织细胞收集方法，其特征在于：在步骤(2)中，染色时，切片于水中清洗后，在Mayer氏苏木素染液中染30-60分钟，水洗30秒，0.2％伊红染5秒。

8.根据权利要求6或7所述的一种基于激光显微切割技术的骨组织细胞收集方法，其特征在于：在步骤(2)中，固定时的温度保持在与步骤(1)相同的低温保存温度。

9.根据权利要求8所述的一种基于激光显微切割技术的骨组织细胞收集方法，其特征在于：在步骤(3)中，在波长355nm的紫外光下将目标细胞切割下来。

10.根据权利要求9所述的一种基于激光显微切割技术的骨组织细胞收集方法，其特征在于：在步骤(3)中，切下来的细胞直接掉落并收集在固定于载物台下方的PCR管内。