[发明专利]一种测定植物细胞保存再生率的方法

权利要求书

1.一种快速、高效测定植物细胞超低温保存后再生率的方法，其特征在于，包括以下步骤：利用荧光染料与经过保存后的细胞结合，测定荧光强度，根据荧光的颜色和强度判断所述经过保存后的细胞的再生率；所述荧光染料包括荧光素双醋酸酯或荧光素双醋酸酯与碘化丙啶的混合物。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述植物细胞保存的方法包括超低温保存。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述超低温保存的方法，包括以下步骤：(1)将植物胚性愈伤组织与装载溶液混合进行加载处理，得加载愈伤组织；所述装载溶液由WPM基础培养基、184g/L甘油和136.8g/L蔗糖组成；

(2)将所述加载愈伤组织与玻璃化溶液2溶液混合进行玻璃化处理，得玻璃化愈伤组织；所述玻璃化溶液2溶液由WPM基础培养基、300g/L甘油、150g/L乙二醇、150g/L二甲基亚砜和0.4mol/L蔗糖组成；

(3)将所述玻璃化愈伤组织置于液氮中保存。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤(1)所述植物胚性愈伤组织的制备方法，包括将植物种子在诱导培养基中诱导培养2周；所述诱导培养基以WPM为基本培养基，还包括以下组分：2,4D 1mg/L、聚乙烯吡咯烷酮1g/L、干酪素1g/L、活性炭1g/L、质量体积百分比为3％的蔗糖和质量体积百分比为0.3％的琼脂。

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述诱导培养为暗培养，所述诱导培养的温度为25℃。

6.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤(1)所述混合时，所述植物胚性愈伤组织与装载溶液的体积比为1:8。

7.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤(2)所述混合前，还包括吸弃装载溶液；步骤(2)所述混合时，所述加载愈伤组织与玻璃化溶液2溶液的体积比为1:8。

8.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤(2)所述玻璃化处理为在冰上进行，所述玻璃化处理的时间为30min。

9.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述荧光素双醋酸酯经与活细胞结合后，在波长为488nm的光下激发绿色荧光。

10.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述碘化丙啶经与死细胞结合后，在波长为545nm的光下激发红色荧光。