[发明专利]用于靶向敲除人NKG2A/KLRC1基因的sgRNA、表达载体、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于靶向敲除人NKG2A/KLRC1基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-56中的任一种所示。

2.根据权利要求1所述的一种用于靶向敲除人NKG2A/KLRC1基因的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列的设计方法，包括以下步骤：

S1.选择NKG2A/KLRC1基因上的不同剪切形式的共有外显子；

S2.在位于第一个起始密码子ATG之后的共有外显子中找出5’-GGN(19)GG-3’、5’-GN(20)GG-3’或5’-N(21)GG-3’的序列，即得。

3.根据权利要求2所述的一种用于靶向敲除人NKG2A/KLRC1基因的sgRNA，其特征在于，所述序列不包含连续3个以上的碱基A或T。

4.根据权利要求2所述的一种用于靶向敲除人NKG2A/KLRC1基因的sgRNA，其特征在于，所述序列为单条序列或成对序列，所述成对序列的间隔距离为0-200bp。

5.一种表达权利要求1～4任一项所述的用于靶向敲除人NKG2A/KLRC1基因的sgRNA的表达载体。

6.一种包含权利要求1～4任一项所述的用于靶向敲除人NKG2A/KLRC1基因的sgRNA的CRISPR/Cas9系统，其特征在于，还包括Cas9蛋白表达质粒。

7.一种用于靶向敲除人NKG2A/KLRC1基因的sgRNA的试剂盒，其特征在于，包括表达sgRNA的载体和Cas9蛋白，所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-56中的任一种所示。

8.一种用于靶向敲除人NKG2A/KLRC1基因的sgRNA组合物，其特征在于，所述sgRNA组合物包含核苷酸序列为SEQ ID NO.1-56的sgRNA中的至少两种。

9.如权利要求1～4任一项所述的用于靶向敲除人NKG2A/KLRC1基因的sgRNA在制备用于治疗肿瘤疾病的免疫细胞药物中的应用。

10.如权利要求8所述的用于靶向敲除人NKG2A/KLRC1基因的sgRNA组合物在制备用于治疗肿瘤疾病的免疫细胞药物中的应用。