[发明专利]一种强直性脊柱炎治疗纳米颗粒的合成方法

说明书

本发明公布一种强直性脊柱炎治疗纳米颗粒的合成方法。主要步骤包括:1)PEG水溶液的制备；2)PLGA有机溶液的制备；3)薄膜水化法合成IL‑10@MicroRNA‑125a纳米颗粒。强直性脊柱炎发病机制的中心是效应器和调节性T细胞(Tregs)的失衡。其中MicroRNA‑125a可以调节Treg细胞，Treg通过抑制致病性自身反应性免疫细胞来稳定免疫稳态起着关键作用。白介素‑10(IL‑10)是一种多细胞源、多功能的细胞因子，调节细胞的生长与分化，参与炎性反应和免疫反应，是目前公认的炎症与免疫抑制因子。PLGA‑PEG无毒，生物相容性好，具有良好的成囊和成膜的性能。

技术领域

本发明涉及纳米颗粒的合成技术领域,具体涉及一种通过PLGA-PEG包裹MicroRNA-125a和白介素-10(IL-10)的策略,合成MicroRNA-125a@IL-10@PEG-PLGA纳米制剂的方法。

背景技术

强直性脊柱炎涉及复杂的病理机制，自身免疫性疾病是指对自身抗原的免疫耐受性丧失、组织自身抗原抗体的产生和自身免疫现象的发生。如果这些反应引起组织损伤并引起病理变化或临床症状，则称为自身免疫性疾病。强直性脊柱炎的自身免疫理论已被大多数学者广泛接受。MicroRNA-125a可以调节Treg细胞，Treg通过抑制致病性自身反应性免疫细胞来稳定免疫稳态起着关键作用。

白介素10是一种多细胞源、多功能的细胞因子，调节细胞的生长与分化，参与炎性反应和免疫反应，是目前公认的炎症与免疫抑制因子。避免肾小球中免疫因子过量产生，阻止免疫系统对肾小球造成损伤。

PLGA-PEG是一种两嵌段聚合物。其中PLGA由两种单体——乳酸和羟基乙酸随机聚合而成，是一种可降解的功能高分子有机化合物，其降解产物是乳酸和羟基乙酸，同时也是人代谢途径的副产物，所当它应用在医药和生物材料中时不会有毒副作用，具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能。PEG具有良好的水溶性，赋予了聚合物生物相容性。

发明内容

本发明为克服现有技术的不足，提供一种通过PLGA-PEG包裹MicroRNA-125a和白介素-10(IL-10)的策略,合成强直性脊柱炎治疗纳米颗粒制剂的方法。利用MicroRNA-125a和IL-10抑制免疫过激反应，防止免疫系统攻击自身，以达到治疗强直性脊柱炎的目的。

本发明的技术方案是一种强直性脊柱炎治疗纳米颗粒的合成方法，通过PLGA-PEG包裹MicroRNA-125a和白介素-10(IL-10)的策略,具体步骤如下：

1)称取PLGA材料，加入二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.25-1mg/ml的PLGA有机溶液；2)称取PEG材料，加入水后超声溶解，得到浓度为0.25-1mg/ml的PEG水溶液；

3)称取IL-10材料，加入二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.5-2mg/ml的IL-10有机溶液；4)利用薄膜水化法合成MicroRNA-125a@IL-10@PEG-PLGA纳米颗粒。

(1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上，开始超声，时间设定为12min，温度为0℃，超声频率为4s，2s；

(2)边超声边逐滴加入100uL的IL-10溶液和2ml PEG水溶液，继续超声直至完全混匀；

(3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中，在旋转蒸发器上进行旋蒸，直至直至二氯甲烷和水全部蒸干，瓶底形成一层薄膜。

(4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的MicroRNA-125a，吹悬搅拌至均匀混合，最终得到MicroRNA-125a@IL-10@PEG-PLGA纳米颗粒。

本发明的优势在于：

1)MicroRNA-125a可以调节Treg细胞，Treg通过抑制致病性自身反应性免疫细胞来稳定免疫稳态起着关键作用。