[发明专利]一种快速蛋白染色液

说明书

本发明公开了一种快速蛋白染色液，用于SDS‑PAGE中的蛋白染色，其包括质量体积百分浓度为0.05％‑0.1％的考马斯亮蓝G250、质量体积百分浓度为5％‑15％的硫酸盐、体积百分浓度为5％‑20％的无水乙醇、体积百分浓度为1％‑5％的聚乙二醇和体积百分浓度1％‑10％的有机酸。本发明提供的快速蛋白染色液，是在传统染色液的基础上进行了优化，得到更加清晰的蛋白条带，基本无背景染色，染色结束后无需使用脱色液脱色，只需用自来水水洗即可，大大缩短了检测时间，提高效率，且染色过程未使用有毒有害试剂，避免了对人体造成伤害。

技术领域

本发明涉及SDS-PAGE的蛋白质染色领域，尤其涉及一种快速蛋白染色液。

背景技术

十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)已成为分子生物学实验中最常用的蛋白质分析和检测方法，通过电泳分离蛋白质后，对凝胶进行染色以检测凝胶中的蛋白质。其中蛋白质染色是影响蛋白质检测灵敏性的关键步骤之一，常用的蛋白质染色方法包括以下几种：

(1)银染法，是最灵敏的蛋白质染色方法之一，可检测纳克水平的蛋白质，但是，该方法使用了具有强烈气味和刺激性的多种试剂，例如甲醛、戊二醛、甲醇和乙酸，且实验重复率低，此外，染色的蛋白质有时与下游质谱(MS)蛋白质组学分析不兼容。

(2)荧光染色法，常使用SYPRO Ruby、Deep Purple或Flamingo染料进行荧光染色，也可以检测到纳克级范围内的蛋白质，但同样也需要使用具有强烈气味和刺激性的试剂，且试剂价格昂贵，另外，荧光染色需要相对较长的处理时间，并且需要诸如荧光成像扫描仪和高级软件之类的特殊设备。

(3)有机试剂染色法，有机试剂染色以考马斯亮蓝染色法(Coomasie brilliantblue，CBB)为代表，价格便宜，染色步骤简单，并且可以使用常规扫描仪和软件进行定量；此外，它与质谱蛋白质鉴定完全兼容。尽管其具有很多优点，但其灵敏度不如银染和荧光染色，并且仍然需要很长的染色时间，相对复杂的染色液成分也使其使用不方便。

为了提高考马斯亮蓝染色的灵敏性，人们对原始方法进行了一些改进，主要通过将染料分子转化为胶体颗粒来增强对低丰度蛋白质的检测。如1988年，Neuhoff等人将20％的甲醇和更高浓度的硫酸铵应用于基于CBB G-250的染色液中。在2002年，他们修改了Neuhoff关于络合物质的胶体CBB染色方案，使用硫酸铝代替了硫酸铵，并用毒性较小的乙醇代替了甲醇。2004年Candiano等人在硫酸铵和甲醇的存在下，使用CBB G-250和磷酸建立了Blue Silver染色法。

然而，以上方法均依旧没能摆脱使用乙酸或甲醇这些刺激性的易挥发溶剂，在配制和使用过程中这些试剂会对人体呼吸系统产生严重危害。并且，染色完成后，还需要用脱色液进行脱色，脱色液的成分也有甲醇和乙酸。染色和脱色所需的总时间超过2小时甚至过夜。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种快速、无毒的蛋白染色液，染色效果好，且节约了大量时间。

本发明的技术方案是这样实现的：

一方面，本发明提供了一种快速蛋白染色液，包括质量体积百分浓度为0.05％-0.1％的考马斯亮蓝G250、质量体积百分浓度为5％-15％的硫酸盐、体积百分浓度为5％-20％的无水乙醇、体积百分浓度为1％-5％的聚乙二醇和体积百分浓度1％-10％的有机酸。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述考马斯亮蓝G250的质量体积百分浓度为0.05％，所述硫酸盐的质量体积百分浓度为8％，所述无水乙醇的体积百分浓度为10％，所述聚乙二醇的体积百分浓度为2％，所述有机酸的体积百分浓度5％。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述硫酸盐为硫酸铝或硫酸铵。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述有机酸为柠檬酸或磷酸。