[发明专利]食源性致病菌检测用线基电化学生物传感器及其制备方法及食源性致病菌的检测方法

权利要求书

1.一种食源性致病菌检测用线基电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，包括：

（1.1）制作线基支撑电极并构建线基微流控通道，将所述线基微流控通道与所述线基支撑电极连通并置于基底上；

（1.2）将二维片状纳米材料加入至多聚-L-赖氨酸溶液中搅拌，静置，得到修饰后的二维片状纳米材料，然后将修饰后的二维片状纳米材料涂覆到所述线基支撑电极上以修饰线基支撑电极，再将食源性致病菌的适配子溶液滴加在修饰后的线基支撑电极上，静置，清洗，得到线基电化学生物传感器；所述二维片状纳米材料为二硫化钼纳米材料、石墨烯纳米材料或黑磷纳米材料；

步骤（1.1）中，制作线基支撑电极包括：

制作工作电极和对电极，分别在纺织线上涂覆碳/石墨油墨并于室温下干燥1.5~2.5h，然后再次涂覆碳/石墨油墨并于50~70℃下干燥9~11h；

制作参比电极，在预处理后的纺织线上涂覆银/氯化银油墨并于室温下干燥1.5~2.5h，然后再次涂覆银/氯化银油墨并于50~70℃下干燥9~11h；

构建线基微流控通道的方式是：将另取一根纺织线，并将其一端拆分成多股，作为线基微流控通道；

将所述工作电极、参比电极和对电极平行布置在基底上，将作为线基微流控通道的每股纺织线以垂直于所述工作电极、参比电极和对电极的方式布置并且分别缠绕在所述工作电极、参比电极和对电极上。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1.2）中，所述二维片状纳米材料通过液相剥离法制得。

3.根据权利要求1~2任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤（1.2）中，搅拌时间为50~70min，所述二维片状纳米材料在多聚-L-赖氨酸溶液中的静置条件为：在3~5℃下静置至少12h；

所述适配子溶液滴加在线基支撑电极上后的静置条件为：室温下静置至少1h。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1.2）中，清洗的具体过程为：用PBS缓冲液清洗所述线基支撑电极，再用牛血清蛋白封闭液浸泡至少0.5h，再次用PBS缓冲液清洗。

5.根据权利要求1~4任一项所述的制备方法制得的食源性致病菌检测用线基电化学生物传感器。

6.根据权利要求5所述的食源性致病菌检测用线基电化学生物传感器，其特征在于，其包括基底、设置在所述基底上的线基支撑电极以及设置在所述基底上且垂直于所述线基支撑电极的线基微流控通道，所述线基支撑电极包括平行设置的工作电极、参比电极和对电极，所述线基微流控通道分别缠绕在所述工作电极、参比电极和对电极上。

7.一种食源性致病菌的检测方法，其特征在于，采用权利要求5或6的食源性致病菌检测用线基电化学生物传感器进行检测，其包括以下步骤：

（2.1）采用标准浓度的食源性致病菌液制作标准曲线；

（2.2）将待检测食源性致病菌的食物样品进行预处理，得到待检测菌液，将所述待检测菌液加在线基电化学生物传感器上，孵育，利用电化学工作站检测电流信号值，将得到的信号值与标准曲线对照，得到待检测菌液的浓度。

8.根据权利要求7所述的食源性致病菌的检测方法，其特征在于，

步骤（2.1）中，制作标准曲线的具体过程为：将标准浓度的食源性致病菌液按浓度梯度稀释成10~10⁷cfu/mL不同浓度的标准菌液，将不同浓度的标准菌液分别加在所述线基电化学生物传感器上，在30℃~37℃下孵育10~15min，利用电化学工作站分别检测传感器的电流信号值，根据得到的电流信号值与菌液浓度的线性关系描绘出标准曲线；

步骤（2.2）中，孵育的条件为：30℃-37℃下孵育10~15min。