[发明专利]用于检测SARS-CoV-2的gRNA及试剂盒

权利要求书

1.用于检测SARS-CoV-2的gRNA，所述gRNA包括a)与Cas核酸酶相互作用的框架核酸片段，以及b)与靶核酸结合的特异性核酸片段，所述特异性核酸片段包括SEQ ID NO：4～6中至少一种所示的核酸片段。

2.用于检测SARS-CoV-2的试剂盒，其包含权利要求1所述的gRNA；

优选地，其还包含Cas12a核酸酶和/或具有与Cas12a的旁路单链DNA切割活性类似的Cas核酸酶、单链DNA探针、阳性对照和用于CRISPR检测体系的缓冲液中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，所述Cas12a核酸酶选自FnCas12a、AsCas12a、LbCas12a、Lb5Cas12a、HkCas12a、OsCas12a、TsCas12a、BbCas12a、BoCas12a和Lb4Cas12a中的至少一种；

和/或，所述与Cas核酸酶相互作用的框架核酸片段为SEQ ID NO：37所示；

和/或，所述具有与Cas12a的旁路单链DNA切割活性类似的Cas核酸酶为Cas12b核酸酶；

和/或，所述Cas12b核酸酶选自AacCas12b、Aac2Cas12b、AkCas12b、AmCas12b、AhCas12b和AcCas12b中的至少一种。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，所述单链DNA探针的5′端标记荧光发射基团，3′端标记淬灭基团。

5.根据权利要求2或3所述的试剂盒，所述单链DNA探针的两端分别标记有不同的标记物，分别为第一标记物和第二标记物；

优选地，所述单链DNA探针上还标记有与所述标记物不同的信号物质，且所述信号物质上还标记有所述第二标记物的抗体，如此，当所述单链DNA探针被CRISPR检测体系切割时，所述信号物质与所述第二标记物位于同一核酸片段；

优选地，所述试剂盒还包含试剂条，所述试纸条包括样品垫、反应膜和吸收垫，所述反应膜上设置有检测区和质检区；

其中：

所述检测区固定包被有针对所述第一标记物的第一抗标记物；

所述质检区固定包被有针对所述第二标记物的抗体的二抗；

所述第一标记物与所述第一抗标记物能够形成标记物-抗标记物复合物，且所述第一抗标记物与所述第二标记物的抗体不同。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，所述信号物质选自荧光团、比色标记、量子点、胶体金、生物素、用于拉曼衍射成像的炔烃基团、用于click反应的环烯烃、用于聚合物标记的引发基团、多肽/蛋白分子、LNA/PNA、非天然氨基酸及其类似物、非天然核酸及其类似物和纳米结构；

所述纳米结构包括无机纳米颗粒、NV-center、聚集/组装诱导发光分子、稀土离子配体分子以及多金属氧簇。

7.根据权利要求2、3、6任一项所述的试剂盒，其还包含扩增引物、DNA聚合酶、扩增缓冲液、样品预处理试剂和水中的至少一种；

其中所述扩增引物用于扩增含有所述gRNA靶向序列的核酸片段；

优选地，所述扩增引物是LAMP引物。

8.权利要求1所述的gRNA、或权利要求2～7任一项所述的试剂盒在检测SARS-CoV-2中的非诊断用途。

9.载体系统，其包含一种或多种载体，所述载体包含：第一调控元件和第二调控元件，所述第一调控元件可操作地连接至编码Cas核酸酶的核苷酸片段，所述第二调控元件可操作地连接至编码权利要求1所述gRNA的核苷酸片段。

10.一种改变基因产物表达的方法，包括使用CRISPR-Cas核酸酶体系切割靶DNA以改变基因产物的表达；

所述CRISPR-Cas核酸酶体系包含权利要求1所述gRNA和/或权利要求9所述的载体系统。