[发明专利]用于三赞胶及其合成菌鉴别的分子标记及其制备和应用

权利要求书

1.能够扩增得到分子标记的引物对在非诊断目的三赞胶合成菌快速鉴定中的应用，其特征在于：所述分子标记的核苷酸序列如SEQ No.13所示；所述三赞胶合成菌为鞘氨醇单胞菌，其拉丁文名称为Sphingomonas sp.，保藏编号为CGMCC No.1650。

2.引物对在非诊断目的三赞胶合成菌快速鉴定中的应用，其特征在于所述引物对由引物1和引物2组成，所述引物1的核苷酸序列如SEQ No.5所示，所述引物2的核苷酸序列如SEQNo.6所示；所述三赞胶合成菌为鞘氨醇单胞菌，其拉丁文名称为Sphingomonas sp.，保藏编号为CGMCC No.1650。

3.根据权利要求1所述的分子标记的制备方法，其特征在于具体步骤如下:

A、以保藏编号为CGMCC No.1650、拉丁文名称为Sphingomonas sp.的鞘氨醇单胞菌的基因组DNA作为PCR扩增的模板，以引物1及引物2作为引物进行PCR反应，所述引物1的核苷酸序列如SEQ No.5所示，所述引物2的核苷酸序列如SEQ No.6所示；

B、PCR扩增体系为：10-30ng/μL的模板DNA=1.0μL；10μM的引物1=0.5 μL；10μM的引物2=0.5μL；10mM的dNTP=1.0μL；10×缓冲液=2.5μL；5U/μL的Platinum Taq DNA聚合酶=0.5μL；加超纯水至25μL；

PCR反应条件为：95℃预变性5min；94℃ 45s，62℃ 45s，72℃ 1min，30个循环；72℃延伸10min；

电泳检测PCR扩增产物为950bp左右；

C、PCR扩增产物DNA测序，去除影响测序准确性的两端引物序列后，得到代表三赞胶合成菌的核心保守序列920bp，即为用于鉴别三赞胶合成菌的特异性分子标记，核苷酸序列如SEQ No.13所示。