[发明专利]一种基于GDF9基因编码区突变的蒙古羊繁殖力提高方法

权利要求书

1.一种基于GDF9基因编码区突变的蒙古羊繁殖力提高方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、检测待测蒙古羊基因组中的GDF9基因编码区启动子下游1040bp处是否存在一个T→C的突变，该位点突变导致核酸序列所对应的氨基酸由苯丙氨酸改变为丝氨酸，以确定蒙古羊个体在该位点的基因型；

S2、通过基因型筛选种用蒙古羊，所述GDF9基因的核苷酸序列NCBI ReferenceSequence为NC_019462.2的羊5号染色体，第41767870bp到41770600bp区域；

S3、若蒙古羊基因组中的GDF9基因编码区启动子下游第1040位核苷酸为T时，则其纯合体的基因型为TT，若蒙古羊基因组中的基因编码区启动子下游第1040位核苷酸为C时，则其纯合体的基因型为CC，其杂合体基因型为TC；

S4、通过基因型提高蒙古羊繁殖力为：所述CC基因型蒙古羊的平均产羔数高于TC基因型，基因型TC蒙古羊的平均产羔数高于TT型。

2.根据权利要求1所述的一种基于GDF9基因编码区突变的蒙古羊繁殖力提高方法，其特征在于：所述蒙古羊基因组中的GDF9 1040T＞C SNP的检测方法为：利用PCR方法扩增蒙古羊GDF9基因GenBank Accession Number为NC_019462.2的41768565到41767924位核苷酸的片段，并将扩增产物进行DNA测序，若在127bp位置出现单峰且基因型为T，则此基因型为TT，若在127bp处出现套峰，则此基因型为TC，若在127bp位置出现单峰且基因型为C，则此基因型为CC。

3.根据权利要求2所述的一种基于GDF9基因编码区突变的蒙古羊繁殖力提高方法，其特征在于：所述PCR方法的扩增引物对为具有序列1、2所述的核苷酸。

4.根据权利要求1所述的一种基于GDF9基因编码区突变的蒙古羊繁殖力提高方法，其特征在于：所述蒙古羊的繁殖力体现为每胎产羔数。

5.根据权利要求1所述的一种基于GDF9基因编码区突变的蒙古羊繁殖力提高方法，其特征在于：所述氨基酸序列由包含所述核苷酸序列编码得到的，所述位点突变选自氨基酸序列第347位。

6.根据权利要求5所述的一种基于GDF9基因编码区突变的蒙古羊繁殖力提高方法，其特征在于：所述该位点突变自所对应的氨基酸选自苯丙氨酸与丝氨酸，当所述位点为T时，其对应氨基酸为苯丙氨酸，当所述位点为C时，其对应氨基酸为丝氨酸。

7.根据权利要求2所述的一种基于GDF9基因编码区突变的蒙古羊繁殖力提高方法，其特征在于：所述PCR方法扩增蒙古羊GDF9基因为上下游引物M-F和M-R，以从蒙古羊实验材料提取的基因组为模板，分别用上述引物进行扩增。

8.根据权利要求7所述的一种基于GDF9基因编码区突变的蒙古羊繁殖力提高方法，其特征在于：所述上下游引物M-F和M-R的序列分别如下：

M-F：5’-AAGAAGCTGCTGAGGGTGTA-3’

M-R：5’-GAAAAAAGAATCACTTGGGAAA-3’。

9.根据权利要求7所述的一种基于GDF9基因编码区突变的蒙古羊繁殖力提高方法，其特征在于：所述上下游引物的扩增体系一致，扩增体系的总体积20μL，其中，上下游引物各1μL，模版1μL，预混液10μL，去离子水7μL。

10.根据权利要求7所述的一种基于GDF9基因编码区突变的蒙古羊繁殖力提高方法，其特征在于：所述扩增后的产物经过95℃预变性3min，98℃变性10s，58℃退火30s，72℃延伸15s，35个循环，72℃延伸10min，4℃保存，然后进行测序。