[发明专利]一种针对人白介素-2的高亲和力兔单克隆抗体及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种针对人白介素‑2的高亲和力兔单克隆抗体及其应用。本发明用单个B细胞筛选和培养技术成功开发了高亲和力的抗人白介素‑2兔单克隆抗体A和B，并证明了这两个抗体可以识别人白介素‑2蛋白表面的不同抗原决定簇，可以用于开发双抗夹心法酶联免疫检测试剂盒；利用该抗体开发的双抗夹心法酶联免疫检测试剂盒，具有特异性高、抗干扰能力强、检测灵敏度高和稳定性好等优点，检测灵敏度为1pg/ml(1ng/L)。该方法学的建立，提供了一种能够在血清、细胞培养基样品中稳定检测极微量水平人白介素‑2蛋白的试剂盒，在临床诊断和科研应用上具有重要的意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种针对人白介素-2的高亲和力兔单克隆抗体及其应用。

背景技术

人白介素-2蛋白(IL-2，以下简称“IL-2”)，又名T细胞生长因子(T cell growthfactor,TCRF)，由133个氨基酸组成，分子量大小为15.4KDa。IL-2由含153个氨基酸的前体蛋白合成。与成熟的IL-2相比，前体蛋白在N端(即氨基末端)用于20个氨基酸的疏水分泌信号肽序列；分泌到胞外后，该信号肽会被切除，产生成熟的IL-2蛋白。IL-2蛋白在58和105为半胱氨酸之间拥有一对二硫键，对于IL-2的生物活性至关重要。

在人体内，IL-2蛋白主要由T淋巴细胞在受到抗原物质或者是丝裂原刺激后合成并分泌；此外，B淋巴细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)及单核-巨噬细胞也能够产生IL-2。这些免疫细胞除了能产生IL-2蛋白之外，还能对IL-2蛋白产生一定的生物学反应，比如T淋巴细胞在体外的生长需要一定量的IL-2蛋白持续刺激、T淋巴细胞和巨噬细胞在受到IL-2的刺激作用下能够诱导并增强其细胞毒作用等。

由于IL-2能诱导和增强细胞毒活性，因此IL-2在某些疾病、特别是肿瘤治疗的研究上得到了广泛的应用。例如，单独使用IL-2或与LAK细胞等联合使用在肿瘤治疗方面取得了一定的疗效。IL-2还被应用于病毒感染、免疫缺陷病及自身免疫病的治疗。但IL-2在治疗过程中，还会引起一些不良反应，如发热、呕吐、毛细血管渗漏综合征以及水盐代谢紊乱和肾、肝、心、肺功能异常等，因此，在应用IL-2进行临床治疗的过程中，检测患者血清中IL-2水平的变化具有非常重要的临床意义。

另外，IL-2产生或表达异常与临床疾病有密切关系，通过测定人外周血、尿液或人激活淋巴细胞培养上清液中的IL-2水平，可作为对肿瘤、心血管病、肝病、红斑狼疮、麻风病、艾滋病等疾病诊断、预后及观察的方法，并且还能够用于对器官移植后有无排斥反应的早期诊断。在正常人的血清中，IL-2蛋白水平的参考范围为3.5～6.5ng/L(ELISA方法)，属于一个比较低的水平，因此开发一种高灵敏度的IL-2蛋白检测方法学，具有非常重要的意义。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种针对人白介素-2的高亲和力兔单克隆抗体及其应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。

本发明是这样实现的，一种针对人白介素-2的高亲和力兔单克隆抗体，其特征在于：所述兔单克隆抗体为兔单克隆抗体A或兔单克隆抗体B；

所述兔单克隆抗体A轻链上互补决定区CDR1、CDR2及CDR3的序列分别为SEQ IDNO:5，SEQ ID NO:6及SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；

所述兔单克隆抗体B轻链上互补决定区CDR1、CDR2及CDR3的序列分别为SEQ IDNO:15，SEQ ID NO:16及SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。

进一步地，所述兔单克隆抗体A重链上互补决定区CDR1，CDR2及CDR3的序列分别为SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；