[发明专利]一种重组小鼠抗人白介素19单克隆抗体、制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种重组小鼠抗人白介素19单克隆抗体、制备方法和应用，包括重链恒定区、重链可变区、轻链恒定区和轻链可变区，其中轻链可变区含有CDR1、CDR2、CDR3，轻链可变区编码基因序列依次如SEQ ID NO.1‑3，轻链可变区翻译氨基酸序列依次如SEQ ID NO.4‑6所示，重链可变区含有CDR1、CDR2、CDR3，重链可变区编码基因序列依次如SEQ ID NO.7‑9，重链可变区翻译氨基酸序列依次如SEQ ID NO.10‑12所示，本发明涉及基因工程方面单克隆抗体的制备技术领域。该重组小鼠抗人白介素19单克隆抗体、制备方法和应用，该重组单抗结构明确、特异性强、稳定性更好，在多种检测方法中表现出高灵敏度，适合体外诊断试剂中的应用，批间差异小，抗体效价高，抗体产量高，单位生产成本低。

技术领域

本发明涉及基因工程方面单克隆抗体的制备技术领域，具体为一种重组小鼠抗人白介素19单克隆抗体、制备方法和应用。

背景技术

抗体是生命科学领域最重要的科研工具之一，传统的抗体生产是通过免疫动物获得单克隆或多克隆抗体。如抗人白介素19（IL19）抗体的生产，多克隆抗体是通过向动物体内注射人白介素19（IL19）蛋白作为免疫原，获取免疫后的血清制得，理论上，只要该动物不死亡，抗体可以持续获取。单克隆抗体是用人白介素19（IL19）蛋白免疫宿主动物后，提取能识别该免疫原的B细胞，使其与骨髓瘤细胞融合，经过筛选培育出能永久增殖产生抗体的杂交瘤细胞。

与之对比的是，重组抗体的生产只需要前期免疫动物，或者甚至不需要免疫动物，仅通过一定的途径获取到抗人白介素19（IL19）抗体的序列（可进行杂交瘤细胞中目的基因的钓取或者人为设定基因序列，后期再通过检测手段验证表达的蛋白是否识别目标蛋白），再将目标序列插入到克隆载体中，进行大量扩增后，转入真核或原核细胞中培养表达，产生抗体。因为该抗体基因明确，即使细胞中途死亡，也可以通过重新转入基因序列，再次获得性能稳定的重组抗体。

因此，基于以上原理和生产工艺的不同，重组抗人白介素19（IL19）抗体相较于传统方式获取的抗体，在特异性、敏感性、批间差异性方面优势明显，这在很大程度上提高了科研实验的成功率，且重复性好。总言之，极大的节省了科研项目的人力、物力。

发明内容

（一）解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种重组小鼠抗人白介素19单克隆抗体、制备方法和应用，该重组抗体基因结构明确、特异性强、效价高、稳定性好，在多种检测方法中表现出高灵敏度，适合体外诊断试剂中的应用。

（二）技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种重组小鼠抗人白介素19单克隆抗体、制备方法和应用，包括重链恒定区、重链可变区、轻链恒定区和轻链可变区，其中轻链可变区含有CDR1、CDR2、CDR3，所述轻链可变区编码基因序列依次如SEQ ID NO.1-3，且轻链可变区翻译氨基酸序列依次如SEQ ID NO.4-6所示，所述重链可变区含有CDR1、CDR2、CDR3，所述重链可变区编码基因序列依次如SEQ ID NO.7-9，且重链可变区翻译氨基酸序列依次如SEQ ID NO.10-12所示。

本发明还公开了一种含有重链可变区CDR1、CDR2和CDR3编码基因的表达载体。

本发明还公开了一种含有轻链可变区CDR1、CDR2和CDR3编码基因的表达载体。

本发明还公开了一种重组小鼠抗人白介素19单克隆抗体的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

S1、用人白介素19抗原免疫小鼠，获得小鼠脾细胞，将小鼠脾细胞与SP20细胞进行融合制得杂交瘤细胞，提取总RNA，逆转录获得cDNA；

S2、以cDNA为模板，进行引物设计，扩增出对应抗体的重链可变区和轻链可变区的编码基因；