[发明专利]一种高效提取动物血液中DNA的方法

权利要求书

1.一种高效提取动物血液中DNA的方法，其特征在于，操作步骤如下：

1)取25μl蛋白质消化酶至1.5ml离心管底，再加入250μl细胞裂解液；

2)取250μl动物全血抗凝血加入步骤1)的离心管中，加入后即刻3000rpm高速涡旋震荡至少15秒；

3)将步骤2)获得的混合液离心管在65度水浴孵育20分钟，其中孵育到10分钟时取出离心管，3000rpm涡旋震荡5秒，再放回水浴锅继续孵育10分钟，取出离心管10000g离心2秒；

4)加260ul无水乙醇至步骤3)完成后的离心管中，即刻3000rpm高速涡旋震荡20秒以上至充分混匀，再将离心管于10000g离心2秒；

5)将硅胶膜柱子放入2ml的新离心管中，将步骤4)得到的消化裂解液用1000μl的移液枪转入硅胶膜柱子中，然后离心管在10000g离心1分钟，弃液及离心管；

6)将步骤5)获得的硅胶膜离心柱放入新的2ml离心管中，用500μl蛋白洗涤液冲洗，10000g离心1分钟，弃液；所述蛋白洗涤液为使用前在蛋白洗涤液原液中每80ml加入32ml异丙醇,混匀备用；

7)在步骤6)获得的离心管中加入700μl漂洗液冲洗，10000g转离心1分钟，弃液；所述漂洗液为使用前在漂洗液原液中每25ml加入无水乙醇100ml,混匀备用；

8)重复步骤7；

9)将完成步骤8)后的离心管于12000g离心5分钟，让柱干燥；

10)将完成步骤9)的硅胶膜离心柱取出后再置于无核酸酶的离心管中，加100-200μlDNA洗脱液，室温停留5分钟后，13000g转离心1分钟，分离并保留离心液，所述DNA洗脱液使用前要预热至65℃；

11)将步骤10)获得的离心液再次加入步骤10)第一次洗脱后的硅胶膜离心柱中，室温停留5分钟后，13000g转离心1分钟，留液弃柱；

12)步骤11)获得的离心液即为动物血液DNA提取液，于-20℃保存。

2.根据权利要求1所述高效提取动物血液中DNA的方法，其特征在于，步骤2)所述取250μl动物全血抗凝血加入步骤1)的离心管中，当血样不足250μl时用DNA洗脱液补足。

3.根据权利要求1所述高效提取动物血液中DNA的方法，其特征在于，当需要除去RNA时，则在步骤1)中加入5μl RNA酶，所述RNA酶浓度为50mg/ml。

4.根据权利要求1所述高效提取动物血液中DNA的方法，其特征在于，所述细胞裂解液、蛋白质消化酶、蛋白洗涤液原液、漂洗液原液、DNA洗脱液为市售OMEGA血液DNA提取试剂盒中的成品。