[发明专利]一种用于蛋白质组学微量样本制备的装置

权利要求书

1.一种微量样品制备的装置，包括C18-Tip和HILIC-Tip；

所述C18-Tip能够实现蛋白消化和N-聚糖释放；

所述HILIC-Tip能够富集N-聚糖。

2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于：所述C₁₈-Tip包括两层C8膜及位于其间的C18填料；

所述HILIC-Tip包括C8膜和位于所述C8膜上的HILIC填料；

具体的，所述C18-Tip和HILIC-Tip均还包括放置上述各部件的容器；所述容器具体为移液枪头；

所述C18填料的质量，按照蛋白：C18＝10μg：1mg；

所述HILIC填料的质量，按照蛋白：HILIC＝10μg：0.5mg。

3.根据权利要求1或2所述的装置，其特征在于：所述C18-Tip进行如下活化：

依次向所述C18-Tip中加入ACN、50％ACN+0.1％TFA(v/v)水溶液和0.1％TFA(v/v)水溶液，离心，除去液体。

4.根据权利要求3所述的装置，其特征在于：每次活化所用活化剂的用量均为100μl；

所述离心步骤中，离心力为500-2000g；具体为1500g；

用所述ACN离心的时间为20-60s；具体为30s；

用所述(50％ACN+0.1％TFA)水溶液离心的时间为50-100s；具体为60s；

用所述0.1％TFA水溶液离心的时间为80-150s；具体为90s；

所述ACN代表纯乙腈；

所述TFA代表三氟乙酸。

5.根据权利要求1-4任一所述的装置，其特征在于：所述HILIC-Tip进行如下活化：

在所述HILIC-Tip中加入100μl 1％TFA溶液，1500g离心90s，除去液体，重复3次；

然后在所述HILIC-Tip中加入100μl 80％ACN+1％TFA溶液，1500g离心60s，除去液体，重复3次。

6.权利要求1-5任一所述装置在微量样品制备中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述样品为细胞、组织或体液。

8.一种微量样本蛋白质组学全流程样本制备的方法，包括：

1)在权利要求1-5任一所述装置的所述C18-Tip中，将蛋白消化成肽段后释放N-糖链，离心，进行肽段的脱盐或洗脱N-糖链，再加入冲洗非N-糖链的流动相离心洗脱肽段；

2)将所述步骤1)处理后的含N-糖链的物质置于所述HILIC-Tip中，离心去除非N-糖链，富集N-糖链。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述步骤1)冲洗非N-糖链的流动相由水、乙腈和三氟乙酸组成；所述水、乙腈和三氟乙酸的体积比为20:80:0.1-1或20:80:0.5；具体为20:80:1；

所述脱盐/洗脱N-糖链的流动相为三氟乙酸的水溶液；具体为体积百分浓度0.1％的三氟乙酸的水溶液；

洗脱肽段的流动相由水、乙腈和三氟乙酸组成；所述水、乙腈和三氟乙酸的体积比为(50-20)：(50-80)：0.1；具体为50：50：0.1。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述步骤1)和2)离心步骤中，离心力为500-2000g；具体为1500g；时间为20-90s；具体为30s。