[发明专利]用于人造血干/祖细胞的离体扩增的组合物和方法在审
| 申请号： | 202010354554.7 | 申请日： | 2015-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN112063586A | 公开（公告）日： | 2020-12-11 |
| 发明（设计）人： | 柴力;立津央;丹尼尔·杰弗里·特南;詹姆斯·艾略特·布拉德讷;亚历山大·费德拉提恩 | 申请（专利权）人： | 布里格姆及妇女医院股份有限公司;达纳-法伯癌症研究所有限公司;新加坡国立大学 |
| 主分类号： | C12N5/0789 | 分类号： | C12N5/0789;A61K35/28;A61P7/00 |
| 代理公司： | 北京信慧永光知识产权代理有限责任公司 11290 | 代理人： | 董世豪;张淑珍 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 人造 细胞 扩增 组合 方法 | ||
1.对一批量的经扩增的造血细胞在体外或离体地进行遗传修饰的方法，所述方法包括：
a.获得一批量的造血细胞；
b.在至少一种组蛋白脱乙酰酶抑制剂(HDACi)和至少一种生长因子的存在下对所述量的造血细胞进行培养，以扩增所述造血细胞；以及
c.使经扩增的造血细胞与核酸序列接触，其中，所述核酸序列修饰所述量的造血细胞。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述造血细胞包括造血干细胞(HSC)。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述造血细胞包括造血干祖细胞(HSPC)。
4.如权利要求1所述的方法，其中，所述造血细胞分离自脐带血、骨髓或外周血。
5.如权利要求1所述的方法，其中，所述至少一种HDACi选自于由曲古抑菌素(TSA)、MS275、SAHA、VPA、UNC0638和HDAC6抑制剂WT161所组成的组。
6.如权利要求1所述的方法，其中，所述至少一种生长因子选自于由干细胞因子(SCF)、flt3配体(FL)、白介素-3(IL3)和白介素-6(IL6)所组成的组。
7.如权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括：在步骤b中，在选自于由JQ1-S、JY1、UNC0638、JMJD3、JQ-EZ-05、SR1、DBZ、dmPGE2和UM171所组成的组中的一种或多种小分子的存在下，进一步对所述量的造血细胞进行培养。
8.如权利要求1所述的方法，其中，所述核酸序列编码核酸酶。
9.如权利要求8所述的方法，其中，所述核酸酶选自于由锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)以及与CRISPR相关的蛋白(Cas)核酸酶所组成的组。
10.如权利要求1所述的方法，其中，所述核酸序列编码慢病毒。
11.如权利要求1所述的方法，其中，所述接触为转染或转导。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，所述方法进一步包括对表达所述核酸序列的修饰后的经扩增的造血细胞进行选择的步骤。
13.一种组合物，其包含通过权利要求1-12中任一项所述的方法制备的一批量的经扩增的造血细胞。
14.如权利要求13所述的组合物，其进一步包含药学上可接受的载体。
15.对一批量的经扩增的造血细胞在体外或离体地进行修饰的方法，所述方法包括：
a.获得已在至少一种组蛋白脱乙酰酶抑制剂(HDACi)和至少一种生长因子的存在下进行培养的一批量的造血干细胞，其中，所述至少一种HDACi和至少一种生长因子能够扩增所述造血细胞；以及
b.用核酸序列转染经扩增的造血细胞。
16.如权利要求15所述的方法，其中，在选自于由JQ1-S、JY1、UNC0638、JMJD3、JQ-EZ-05、SR1、DBZ、dmPGE2和UM171所组成的组中的一种或多种小分子的存在下，进一步对所述量的造血细胞进行培养。
17.一种组合物，其包含通过权利要求15或16所述的方法制备的一批量的经扩增的造血细胞。
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