[发明专利]一种PRRSV广谱中和单克隆抗体及其应用

说明书

本发明采用PRRSV病毒液‑SD16作为免疫原，免疫Balb/c小鼠。经细胞融合，病毒感染Marc145细胞筛选克隆，获得高效分泌单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞系，获得鼠单克隆抗体MAB‑GP3。用ELISA技术测定该单克隆抗体MAB‑GP3的亚型为IgG2b型单克隆抗体。PRRSV‑I型和PRRSV‑II型病毒感染Marc145细胞，利用IFA技术用该单克隆抗体进行检测，证明单克隆抗体MAB‑GP3对PRRSV‑I和PRRSV‑II型病毒具有广谱反应性。随后用其进行病毒中和实验，利用Western blot技术和qPCR技术证明该单克隆抗体对PRRSV‑I和PRRSV‑II型病毒都具有中和活性，可阻止病毒入侵，保护机体免受感染。

技术领域

本发明属于生物领域，具体涉及一种具有广谱中和活性的PRRSV单克隆抗体，能广谱中和I型和II型病毒。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndromevirus，PRRSV）引起的以母猪流产和仔猪呼吸障碍为主要特征的病毒性传染病，并能引起严重的免疫抑制。该病毒已在全球猪群中广泛传播，给世界养猪业造成了巨大的经济损失，已成为全球规模化猪场的主要疫病之一，也是全球猪病控制上的一大难题。PRRSV是有囊膜的单股正链RNA病毒，属于动脉炎病毒科，动脉炎病毒属。目前PRRSV有两种基因型：1型亦称欧洲型（Lelystad原型）和2型亦称北美型（VR2332原型），PRRSV-1和PRRSV-2株核苷酸序列约有60%相似性。其中PRRSV-II型病毒包括VR2385，VR2332，CH1a，SD16等， PRRSV-I型毒目前中国发现的有GZ11。

中和抗体是当病原微生物侵入机体时会产生相应的抗体。病原微生物入侵细胞时需要依赖病原体自身表达的特定分子与细胞上的受体结合，才能感染细胞，并进一步扩增。中和抗体是B淋巴细胞产生的某些抗体，能够与病原微生物表面的抗原结合，从而阻止该病原微生物黏附靶细胞受体，防止侵入细胞。中和抗体在抗猪繁殖与呼吸综合征病毒感染过程中起重要作用, 在自然感染PRRSV的过程中，中和抗体产生较晚，为病毒在宿主体内大量复制并感染其他易感动物提供了充裕的时间。然而被动输入PRRSV的中和抗体可预防PRRSV感染妊娠母猪，并且对母猪和仔猪都可起到消除性免疫作用。

然而由于不同PRRSV毒株的核酸序列差别较大存在抗原性存在差异，导致单一毒株致弱的PRRSV弱毒疫苗难以对核酸序列差别较大的野毒难以产生完整的保护。另一方面，临床上也有报道在猪群上也检测个别PRRSV感染猪个体的血清样本含有的多克隆血清可同时中和1型和2型PRRSV病毒的感染，提示不同来源的PRRSV病毒上存在保守的抗原表位可刺激机体产生广谱中和抗体，例如Eric Nelson对来自一个群体的5个血清样品试验使用多个1型和2型PRRSV分离株进行检测，血清与90%的2型PRRSV毒株发生反应，滴度为16-56；并意外发现可与90%的1型PRRSV发生反应，滴度大于80（陈错等，《猪业科学》，2017,34（4）：25-26）。现有技术中也出现了具有较高中和活性的单克隆抗体，例如刘梦莹等（《中国预防兽医学报》，2019,41（6）：641-644）制备的MAb LM26仅针对PRRSV SD53株具有中和活性，中和效价最高为1:50；B. Pirzadeh等（Journal of General Virology (1997), 78, 1867–1873）所制备的针对GP5的单克隆抗体对于美洲型VR-2332具有中和活性，中和效价为1:32-1:128，但是其对于欧洲型（Lelystad原型）不具备中和活性。但是，现有研究中尚未报道具有广谱中和的单克隆抗体及其应用。本发明鉴定出一株PRRSV特异性单克隆抗体，其所识别的保守表位广泛存在于不同基因型的PRRSV毒株，并且该抗体可在体外实验上中和不同PRRSV毒株对易感细胞的感染。

发明内容