[发明专利]一种基于二硫化钼结合分子信标荧光探针的miRNA-155检测方法

说明书

本发明公开了一种基于二硫化钼结合分子信标荧光探针的miRNA‑155检测方法，步骤是：制备MoS₂结合MB的核酸探针；定量检测miRNA‑155；计算miRNA‑155浓度对数与荧光强度比F/F₀的线性关系式；检测健康人血清中miRNA‑155的表达水平；检测多发性骨髓瘤患者血清中miRNA‑155的表达水平；分析健康人与MM患者血清中miRNA‑155表达水平的差异。本发明利用一种单层MoS₂结合MB的核酸探针简化了MM血清中miRNA的检测，为诊断MM提供了有效的方法，并且该方法具有背景信号低、灵敏度高、成本低、耗时少等优点。

技术领域

本发明属于纳米生物医学领域，涉及一种荧光探针，具体涉及一种基于二硫化钼结合分子信标荧光探针的miRNA-155检测方法。

背景技术

多发性骨髓瘤(MM)是一种恶性的克隆浆细胞增殖性肿瘤，由于其早期无明显临床表现，并且其分型诊断和检测标准比较复杂特殊，临床上对MM的误诊率高达40％-50％。因此，MM的早期诊断是良好预后的保证。在人体外周血中存在具有较高稳定性和特异性的内源性核酸分子，其检测更加方便快捷，因此通过检测血清中的特征核酸分子(核酸标志物)表达水平变化对MM进行诊断和评价是一个较为理想的途径。

microRNA(miRNA)是一种大小约21～25个碱基的单链小分子RNA，研究人员一直致力于miRNA与疾病相关的细胞中的影响和作用，发现其是细胞增殖、分裂、分化和凋亡过程的关键调节因子。miRNA存在于各种体液中，例如唾液、尿液、血液等，在不同的肿瘤疾病中表现为抑癌基因或是癌基因，可作为MM的生物学指标，因此通过检测疾病血液中miRNA的表达水平可以判断其是何种基因，并据此调节和控制miRNA的表达而为疾病的干预提供指导。

已有研究表明，多种miRNA已成为肿瘤、癌症等疾病的生物学标志物。近期在MM的miRNA生物标志物领域许多学者研究了多种miRNA与MM疾病之间的关系以及内在分子机制，然而大部分都是利用qRT-PCR方法研究细胞中miRNA的表达水平，虽然该方法精确度比较高，但是费用昂贵且步骤繁琐。

发明内容

为了解决现有方法的耗时长、成本高、灵敏度低等问题，本发明提供一种基于二硫化钼结合分子信标荧光探针的miRNA-155检测方法。

为实现上述目的，本发明提供一种基于二硫化钼结合分子信标荧光探针的miRNA-155检测方法，具体步骤如下：

1)取单层二硫化钼纳米片溶液与MB溶液混合制作成荧光探针；其中PolyC₁₅-MB是分子信标探针靶序列5’端连接含有15个胞嘧啶碱基的单链DNA，3’端连接FAM荧光素的分子信标探针，PolyC₁₅-MB具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；

2)取不同浓度的miRNA-155溶液与所述荧光探针结合形成异源双链体，释放荧光并利用荧光光谱仪激发FAM荧光素获得荧光光谱图；

3)计算miRNA-155浓度对数与荧光强度比F/F₀的线性关系式；

4)分别提取并纯化健康人和多发性骨髓瘤患者血清中的总RNA；

5)分别取不同体积的健康人和多发性骨髓瘤患者血清中的总RNA溶液与所述荧光探针结合形成异源双链体，释放荧光并利用荧光光谱仪激发FAM荧光素获得荧光光谱图；

6)比较分析健康人与多发性骨髓瘤患者血清中miRNA-155表达水平的差异。

优选的，步骤1)所述荧光探针的制作步骤是：将100uM的0.5uL PolyC₁₅-MB(在0.1％DEPC水中)和100nM的250uL单层二硫化钼纳米片添加到500uL HEPES缓冲液中，在室温避光条件下振荡1小时，即得。