[发明专利]一种酵母工程菌种发酵与纯化工艺

说明书

本发明公开了一种酵母工程菌种发酵与纯化工艺，属于微生物培养领域。本发明先进行液体培养基的配制，再利用乳酸菌对液体培养基进行发酵处理，随后加入肽聚糖酶水解，制得发酵培养基；再向发酵培养基中接种酵母菌进行培养增殖，随后向母液中加入聚烯丙胺，继续发酵后，过滤，重新用水分散，再通入氮气，离心分离，洗涤，冻干，即得产品酵母工程菌种。本发明所得酵母工程菌种杂质含量少，活性高。

技术领域

本发明涉及微生物培养领域，具体是一种酵母工程菌种发酵与纯化工艺。

背景技术

当前，奶啤生产企业采用的酵母菌大致分为两类：乳源酵母菌和非乳源酵母菌。非乳源酵母菌主要应用的是啤酒酵母菌和酿酒酵母菌；从生产上来说，奶啤发酵期间需要添加大量麦芽汁，必要时还需要添加啤酒花，导致生产工艺繁琐，耗费大量人力物力，显著提高生产成本；从品质上来说，奶啤产品的风味和口感单一，啤酒味较重，酒精度不易控制，不适宜老人、女士和小孩过多引用。乳源酵母菌主要应用的是马克斯克鲁维酵母菌，从生产工艺上来看，奶啤发酵直接以牛乳为原料，缩减了生产原料，简化了生产工艺，大大降低了生产成本；从品质上来看，奶啤产品更偏重乳饮品的口感和风味，且香气成分更富层次性，增加了饮用的嗜好性，酒精含量较低。

因此，研究人员开始从野生开菲尔粒、天然发酵乳制品中寻找适宜奶啤发酵的优质乳源酵母菌。由于菌株地区来源不同，即使是同一菌种，不同菌株之间其发酵性能、风味特性及口感特性也会有很大的差异。所以，如何培养并纯化出优质的乳源酵母菌株，是目前本领域技术人员亟待解决的问题之一。

发明内容

本发明的目的在于提供一种专利名称，以解决现有技术中的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种酵母工程菌种发酵与纯化工艺，具体步骤为：

(1)配制液体培养基：

(2)乳酸菌处理：利用乳酸菌对液体培养基进行无氧发酵处理，发酵至培养基pH为4～6后，停止发酵，并加入肽聚糖酶，水解后，升温灭酶，得发酵培养基；

(3)接种增殖：向发酵培养基中接种酵母菌，培养增殖，得母液；

(4)纯化：向母液中加入聚烯丙胺后，继续发酵，过滤，得滤饼；将滤饼分散于水中后，通入氮气，离心分离，洗涤，冻干，即得产品酵母工程菌种。

本发明技术方案通过首先利用酵母菌对自制的液体培养基进行发酵处理，且发酵结束后利用肽聚糖酶水解，使乳酸菌细胞壁被溶解后，细胞内组分得以释放进入培养基，乳酸菌自身的活性酶及生长因子可有利于酵母菌发酵过程中保持较高的生物活性，同时避免杂菌对酵母菌的生长造成不良影响。

进一步的，所述配置液体培养基为：按重量份数计，依次取4～10份动物初乳，4～10份葡萄糖，甘油10～15份，聚天冬氨酸3～5份，硫酸钙1～2份，硫代硫酸钠0.1～0.3份，800～1000份水，搅拌分散，得液体培养基。

本发明技术方案利用自行制备的培养基，通过在培养基中加入硫代硫酸钠，可提供还原性环境，避免水中溶解氧对前期乳酸菌的生长繁殖造成不良影响，另外，硫代硫酸钠在乳酸菌长时间发酵过程中被氧化分解，作为后续酵母菌发酵所需的营养元素。

进一步的，所述动物初乳为牛初乳、羊初乳、猪初乳、马初乳中的任意一种。

本发明技术方案通过引入动物初乳，乳酸菌将动物初乳分解后，形成“益生元”，可在产品存放过程中起到良好的保护作用，保护酵母菌冻干和存放过程中不至于丧失活性。

进一步的，所述乳酸菌处理为：按接种量为2～5％向液体培养基中接种乳酸菌，无氧发酵至培养基pH为5.5后，停止发酵，再加入液体培养基重量1～3％的肽聚糖酶，水解后，升温至85℃灭酶，得发酵培养基。