[发明专利]一种人类腺病毒通用核酸检测试剂盒及方法

权利要求书

1.一种人类腺病毒通用核酸检测试剂盒，其中包括提取人腺病毒DNA的提取液、PCR反应液、人类腺病毒阳性对照品、阴性对照品；

PCR反应液中用于DNA扩增反应的引物序列如下：

P1：5’-AGTACGCCGGACAGGATGCTTCGGAGTACC-3’；

P2：3’-CACCCGCTGTTGTCTCACGACCTATAGGCC-5’。

2.根据权利要求1所述的一种人类腺病毒通用核酸检测试剂盒，其特征在于：该反应液包括13μM Taq DNA聚合酶50μL、150μM dNTP 100μL、SyBr染料200μL、15μM尿嘧啶糖基化酶50μL。

3.根据权利要求1所述的一种人类腺病毒通用核酸检测试剂盒，其特征在于：PCR反应体系为20μL，包括所述PCR反应液15μL、所述引物2μL以及样品DNA 3μL。

4.根据权利要求1所述的一种人类腺病毒通用核酸检测试剂盒，其特征在于：PCR反应循环参数为：

94℃，2min；进入循环阶段：94℃变性15-30s，50-60℃退火1min，72℃延伸20s，同35个循环；10℃停止。

5.一种根据权利要求1所述的人类腺病毒通用核酸检测方法，其特征在于：按照先后顺序包括以下步骤：

步骤一：对带待测样本DNA的提取：取少量待测样本2μL，加入相应5倍体积的DNA提取液，均匀混合后置于水浴锅中，以5℃/min的速率进行升温，达到60℃停止升温且放置30min，取出后震荡10min，然后再放入60℃的水浴锅中10min，取出后加入等体积的异丙醇，室温放置2min，12000rpm离心5min后弃上清，加入20μL无菌水溶解制得所述样品DNA，备用；

步骤二：利用primer 5.0设计引物；

步骤三：PCR扩增：配置PCR反应体系，同时设置阳性对照和阴性对照，即获得阳性对照管、待测管和阴性对照管；

步骤四：将上述阳性对照管、待测管和阴性对照管放入到PCR仪中设定PCR参数，进行PCR扩增；

步骤五：取上述扩增结束的PCR液2μL，进行琼脂糖凝胶电泳，将待测管中与阳性对照管对应的条带进行回收测序。