[发明专利]一种均匀的高灵敏表面增强拉曼光谱探针的制备方法及其制备的探针和应用

权利要求书

1.一种均匀的高灵敏表面增强拉曼光谱探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备表面增强拉曼探针A：往金属纳米材料溶液中加入探针DNA单链和拉曼分子，并用封闭DNA链封闭纳米材料表面的剩余结合位点，获得表面增强拉曼探针A；

（2）制备表面增强拉曼探针B：在金属纳米材料表面依次修饰探针DNA的互补DNA单链、拉曼分子，并用封闭DNA链封闭纳米材料表面的剩余结合位点，获得表面增强拉曼探针B；

（3）将探针A和探针B混合，两种探针表面的DNA互补配对形成DNA双链，使的金属纳米材料中的金属纳米粒子的间距减小，形成信号均匀的高灵敏表面增强拉曼探针；

步骤（1）和步骤（2）所述的金属纳米材料指能够实现表面增强拉曼散射的金属纳米材料，包括金、银、铂或者铜；

步骤（1）和步骤（2）所述的拉曼分子指能与金属纳米材料中的金属纳米粒子结合后能够产生表面增强拉曼散射光谱的分子，包括5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)、对巯基苯甲酸、二硝基苯甲酸、罗丹明6G、结晶紫或者尼罗蓝；

步骤（1）和步骤（2）所述的拉曼分子指能与金属纳米材料中的金属纳米粒子结合后能够产生表面增强拉曼散射光谱的分子；

步骤(1)和步骤(2)所述的封闭DNA链是指与探针本身及探针应用目标无特异性作用的DNA链；

步骤（1）所述的探针DNA单链为一端修饰了能与金属纳米材料中的金属纳米粒子结合的化学基团，且与目标分子能特异性结合的DNA单链；步骤（2）所述的探针DNA的互补DNA单链是指在步骤（1）探针DNA单链修饰化学基团的相反一端修饰了能与金属纳米材料中的金属纳米粒子结合的化学基团且能够与步骤（1）所述探针DNA单链通过碱基的互补配对相互结合的DNA单链；所述的化学基团分别修饰在两种DNA单链的5’端和3’端，在两种DNA单链互补后形成双链DNA后位于双链DNA的同一端。

2.一种权利要求1所述的制备方法所制备的均匀的高灵敏表面增强拉曼光谱探针，其结构为二聚体或多聚体结构，纳米粒子位于双链DNA的同一端。

3.一种权利要求1所述的制备方法所制备的均匀的高灵敏表面增强拉曼光谱探针在检测小分子、蛋白质、DNA、RNA物质中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测为向含有均匀的高灵敏表面增强拉曼探针溶液中加入检测的目标分子，并检测拉曼分子的表面增强拉曼光谱强度，根据拉曼分子的表面增强拉曼光谱强度和目标分子浓度之间的校准曲线获得目标分子的浓度；当检测的目标分子为DNA或者RNA时，探针A、探针B不预先混合，直接将探针A、探针B和检测的目标同时混合，并检测拉曼分子的表面增强拉曼光谱强度，根据拉曼分子的表面增强拉曼光谱强度和目标分子浓度之间的校准曲线获得目标分子的浓度。