[发明专利]基于转基因工程细胞株测定糖皮质激素类混合物的方法

权利要求书

1.一种转基因工程细胞株，其特征在于，通过慢病毒感染方式，将绿色荧光蛋白GFP和糖皮质激素受体GR融合蛋白基因整合入Hela细胞染色体中，通过嘌呤霉素puro筛选，最终获得稳定表达GFP-GR的Hela细胞株。

2.一种基于权利要求1所述的转基因工程细胞株测定糖皮质激素类混合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：利用慢病毒包装GFP-GR基因，再感染Hela细胞，获取GFP-GR-puro Hela细胞转基因工程细胞株；

步骤2：向所构建的GFP-GR-puro Hela转基因工程细胞株中加入糖皮质激素类混合物后，通过测定荧光信号从细胞质向细胞核区域的迁移比率，可半定量/定量确定糖皮质激素类混合物含量(以地塞米松计)。

3.如权利要求2所述的基于转基因工程细胞株测定糖皮质激素类混合物的方法，其特征在于，步骤1中构建GFP-GR-puro Hela细胞转基因工程细胞株具体包括以下步骤：

步骤a：将合成的GFP-GR目的基因连接到病毒载体FV026上，构建Lenti-GFP-GR载体；

步骤b：将Lenti-GFP-GR载体、psPAX2载体、pMD2G载体按照质量比2:1:1混合，按照脂质体介导法转染293T细胞，进行病毒包装；

步骤c：将步骤b中检测合格的病毒悬液用于感染Hela细胞，再用含有嘌呤霉素puro的DMEM完全培养基进行筛选，得到所述GFP-GR-puro Hela细胞转基因工程细胞株。

4.如权利要求3所述的基于转基因工程细胞株测定糖皮质激素类混合物的方法，其特征在于，步骤b中所述293T细胞用于转染前，先进行消化，重新接种到细胞培养皿中，待生长至汇合率80％-90％即可用于转染实验。

5.如权利要求3所述的基于转基因工程细胞株测定糖皮质激素类混合物的方法，其特征在于，检测合格的病毒悬液的滴度为1E+7TU/mL。

6.如权利要求1所述的转基因工程细胞株的应用，其特征在于，应用于医药健康、食品安全及环保领域，定量检测体液、食品及环境水源中糖皮质激素类混合物的含量。

7.如权利要求6所述的转基因工程细胞株的应用，其特征在于，应用于定量检测人体和畜禽体液、乳品、污水不同样本中的糖皮质激素类混合物的含量。