[发明专利]黄连配方颗粒的微生物限度检查方法

权利要求书

1.一种黄连配方颗粒的微生物限度检查方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1菌悬液的配制：分别配制金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉的菌悬液；

S2供试液的制备：

S2-1取黄连配方颗粒10 g，加含3%组氨酸的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，振摇至供试品分散均匀，作为1:10的供试液；

S2-2取1:10的供试液20 ml，加含3%组氨酸的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液80 ml，即为1:50的供试液；

S2-3取1:10的供试液10 ml，加含3%组氨酸的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液90 ml，即为1:100的供试液；

S3需氧菌总数计数方法适用性试验：分别设置试验组、供试品组、菌液对照组和稀释剂对照组，并分别计数各组的需氧菌总数；

S4霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验：分别设置试验组、供试品组、菌液对照组和稀释剂对照组，并分别计数各组的霉菌和酵母菌总数；

S5大肠埃希菌检查方法适用性试验：分别设置试验组、供试品组以及阴性对照组培养物，随后接种于相应培养基中，观察结果。

2.根据权利要求1所述的一种黄连配方颗粒的微生物限度检查方法，其特征在于，所述步骤S3包括以下步骤：

S3-1试验组：分别取五份1:100的供试液，每份供试液的体积为1 ml，分别加置于100ml的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，薄膜过滤法过滤后，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗多次，在最后一次冲洗液中分别于五份供试液中加入一种1 ml含菌量10-100cfu的试验菌液，然后取下滤膜并贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上，在33℃的条件下培养3天；其中，五份供试液中加入的试验菌分别为：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉；

S3-2供试品组：取1:100的供试液1 ml，以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替菌液同试验组操作；

S3-3菌液对照组：以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替1:100的供试液同试验组操作；

S3-4稀释剂对照组：取相应量的含3%的组氨酸的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替供试液同试验组操作。

3.根据权利要求1所述的一种黄连配方颗粒的微生物限度检查方法，其特征在于，所述步骤S4包括以下步骤：

S4-1试验组：与步骤S3-1的不同之处在于，供试液选取1:50的供试液，试验菌液为白色念珠菌试验菌液和黑曲霉试验菌液，取下滤膜后贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基上，在20-25℃的条件下培养5天；

S4-2供试品组：取1:50的供试液1ml，以稀释液代替菌液同步骤S4-1的试验组操作；

S4-3菌液对照组：以pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替1:50的供试液，其它同试验组操作；

S4-4稀释剂对照组：取相应量的含3%的组氨酸的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替供试液同试验组操作。

4.根据权利要求1所述的一种黄连配方颗粒的微生物限度检查方法，其特征在于，所述步骤S5具体包括以下步骤：

S5-1菌液制备：制备大肠埃希菌的菌悬液；

S5-2试验组：取1:10的供试液10 ml，加置500 ml含3%聚山梨酯80和0.3%大豆卵磷脂的胰酪大豆胨液体培养基中，另取1 ml含菌量为10-100 cfu的大肠埃希菌菌液，注入上述500ml含3%聚山梨酯80和0.3%大豆卵磷脂的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，于33℃培养18-24h，观察；

S5-3供试品组：取1:10的供试液10 ml，加置500 ml含3%聚山梨酯80和0.3%大豆卵磷脂的胰酪大豆胨液体培养基中，另取1 ml稀释液代替菌液同试验组操作，观察；

S5-4阴性对照组：取相应量的含3%的组氨酸的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替供试液同试验组操作；

S5-5取上述培养物各1 ml至100 ml麦康凯液体培养基中，43℃的条件下培养24-48 h，取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上，33℃的条件下培养18-72 h，观察结果。