[发明专利]一种构建D型流感病毒反向遗传操作系统的方法及其应用

权利要求书

1.一种构建D型流感病毒反向遗传系统的方法，其特征在于，所述方法包括将D型流感病毒的PB2、PB1、P3、HEF、NP、M和NS基因片段共同导入宿主细胞进行培养获得D型流感病毒。

2.如权利要求1所述构建D型流感病毒反向遗传系统的方法，其特征在于，所述PB2、PB1、P3、HEF、NP、M、NS基因片段来源于流感病毒M628株，其GenBank登记号为KF425652.1-KF425658.1。

3.如权利要求1所述构建D型流感病毒反向遗传系统的方法，其特征在于，所述PB2、PB1、P3、HEF、NP、M、NS基因片段通过构建重组载体的方式共同导入宿主细胞中。

4.如权利要求3所述构建D型流感病毒反向遗传系统的方法，其特征在于，所述重组载体构建方式如下：将PB2、PB1、P3、HEF、NP、M或NS基因片段入表达载体的多克隆位点中进行构建；

优选的，所述表达载体为pFluDD，所述载体由pUC18载体(Thermo Fisher Scientific公司)改造而成，具体是将CMV启动子、鼠RNA聚合酶I终止子、人RNA聚合酶I启动子和SV40多聚腺苷酸化信号依次插入到pUC18载体上构建获得。

5.如权利要求1所述构建D型流感病毒反向遗传系统的方法，其特征在于，所述宿主细胞为293T细胞、COS7细胞、MDCK细胞、VERO细胞、HL-8细胞中的一种或多种，优选的，所述宿主细胞为293T细胞。

6.权利要求1-5任一项所述构建D型流感病毒反向遗传系统的方法制备得到的重组D型流感病毒。

7.一组序列，其特征在于，所述序列如下：

SEQ ID NO:1所示：

5’-ACCTCCGAAGTTGGGGGGGAGGCATAAGCAGAGGATGTCA-3’

SEQ ID NO:2所示：

5’-TTTTGGGCCGCCGGGTTATTAGCAGTAGCAAGAGGATTTT-3’

SEQ ID NO:3所示：

5’-ACCTCCGAAGTTGGGGGGGAGGCATAAGCAGAGGATTTTA-3’

SEQ ID NO:4所示：

5’-ACCTCCGAAGTTGGGGGGGAGGCATAAGCAGGAGATTTAG-3’

SEQ ID NO:5所示：

5’-ACCTCCGAAGTTGGGGGGGAAGCATAAGCAGGAGATTTTC-3’

SEQ ID NO:6所示：

5’-ACCTCCGAAGTTGGGGGGGAGGCATAAGCAGGAGATTATT-3’

SEQ ID NO:7所示：

5’-ACCTCCGAAGTTGGGGGGGAGGCATAAGCAGAGGATATTT-3’

SEQ ID NO:8所示：

5’-ACCTCCGAAGTTGGGGGGGAAGCATAAGCAGGGGTGTACA-3’。

8.权利要求7所述序列在构建重组D型流感病毒中的应用。

9.权利要求6所述重组D型流感病毒或权利要求7所述序列在以下任意一个方面的应用：

1)D型流感病毒跨种传播机制研究；

2)制备预防/治疗流感病毒产品。

10.如权利要求9所述重组D型流感病毒或序列在以下方面的应用，其特征在于，所述产品为药物或试剂盒。