[发明专利]以磁性材料与核酸外切酶III构建的癌胚抗原电化学传感器

权利要求书

1.一种以磁性材料与核酸外切酶III构建的癌胚抗原电化学传感器，其特征在于，该电化学传感器由磁性生物复合材料Fe₃O₄@Au NPs-S1-S2-S3在核酸外切酶III辅助下构建得到的；其中，S1为核酸序列，S2为癌胚抗原适配体，S1核酸序列中包含富G序列以及癌胚抗原适配体S2的互补配对序列；S3是富G序列的互补序列。

2.根据权利要求1所述的以磁性材料与核酸外切酶III构建的癌胚抗原电化学传感器，其特征在于，所述磁性生物复合材料Fe₃O₄@Au NPs-S1-S2-S3的构建方法为：先将S1修饰到Fe₃O₄@Au纳米粒子上，再将修饰有S1的Fe₃O₄@Au纳米粒子与S2和S3共孵育，构建得到磁性生物复合材料Fe₃O₄@Au NPs-S1-S2-S3。

3.根据权利要求1所述的以磁性材料与核酸外切酶III构建的癌胚抗原电化学传感器，其特征在于，该电化学传感器的构建方法为：

a)构建磁性生物复合材料Fe₃O₄@Au NPs-S1-S2-S3：先将S1修饰到Fe₃O₄@Au纳米粒子上，再将修饰有S1的Fe₃O₄@Au纳米粒子与S2和S3共孵育，构建得到磁性生物复合材料Fe₃O₄@AuNPs-S1-S2-S3；

b)核酸外切酶III的酶切辅助：向步骤a)构建的磁性生物复合材料Fe₃O₄@Au NPs-S1-S2-S3中分别加入不同浓度的癌胚抗原分别进行孵育，孵育后分别加入核酸外切酶III再孵育；

c)电化学生物传感器的构建：向上述再孵育得到的含有不同浓度癌胚抗原的产物中，分别加入血红素和钾离子，经孵育反应后分别得到含有G-四链体/血红素复合物的混合溶液，将各含有G-四链体/血红素复合物的混合溶液分别通过磁性诱导吸附到磁性玻碳电极表面，测定含有不同浓度癌胚抗原的G-四链体/血红素复合物的DPV信号，建立标准曲线，构建得到癌胚抗原电化学传感器。

4.一种权利要求1或3所述的以磁性材料与核酸外切酶III构建的癌胚抗原电化学传感器检测癌胚抗原的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)构建磁性生物复合材料Fe₃O₄@Au NPs-S1-S2-S3：先将S1修饰到Fe₃O₄@Au纳米粒子上，再将修饰有S1的Fe₃O₄@Au纳米粒子与S2和S3共孵育，构建得到磁性生物复合材料Fe₃O₄@AuNPs-S1-S2-S3；

b)核酸外切酶III的酶切辅助：向步骤a)构建的磁性生物复合材料Fe₃O₄@Au NPs-S1-S2-S3中分别加入不同浓度的癌胚抗原分别进行孵育，孵育后分别加入核酸外切酶III再孵育；

c)电化学传感器的构建：向上述再孵育得到的含有不同浓度癌胚抗原的产物中，分别加入血红素和钾离子，经孵育反应后分别得到含有G-四链体/血红素复合物的混合溶液，将每个含有G-四链体/血红素复合物的混合溶液分别通过磁性诱导吸附到磁性玻碳电极表面，测定含有不同浓度癌胚抗原的G-四链体/血红素复合物的DPV信号，建立标准曲线，构建得到癌胚抗原电化学传感器；

d)未知浓度样品的检测：将未知浓度的癌胚抗原样品加入磁性生物复合材料Fe₃O₄@AuNPs-S1-S2-S3中，按上述步骤b)-c)的方法检测，测得未知浓度的癌胚抗原样品的DPV信号，并根据上述标准曲线得到癌胚抗原样品的浓度。

其中，S1为核酸序列，S2为癌胚抗原适配体，S1核酸序列中包含富G序列以及癌胚抗原适配体S2的互补配对序列；S3是富G序列的互补序列，当S1,S2和S3互补结合时，核酸外切酶III从S1和S3的3’端开始切割双链。