[发明专利]GDF15快速定量荧光微球检测装置及其制备方法

权利要求书

1. 一种GDF15快速定量荧光微球检测装置的制备方法，其特征在于：所述GDF15快速定量荧光微球检测装置的结构是：样品垫（1）、免疫荧光玻璃纤维膜（2）、免疫硝酸纤维素膜（3）、吸收垫（4）分别粘贴在塑料板（5），所述免疫硝酸纤维素膜（3）的两端分别与吸收垫（4）、免疫荧光玻璃纤维膜（2）搭接，所述免疫荧光玻璃纤维膜（2）的另一端与样品垫（1）搭接；所述免疫硝酸纤维素膜（3）上设置检测线（T）和质控线（C）；所述的检测线（T）上固相有GDF15-抗体；所述的质控线（C）上喷点羊抗鼠 IgG 多克隆抗体，制备方法包括下列步骤：

（a）免疫荧光微球的制备，取 100ul 固含为 1%的微球悬浮液，用超纯水稀释10倍,即1000ul，加入到EP管中，取 40ul的 N-羟基琥珀酰亚胺液NHS加入微球悬浮液中混匀，然后将 40ul 的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐液EDC加入微球悬浮液中混匀，常温下反应 0.5 小时，将反应后的悬浮液用超声波超声，使管壁上的微球重新悬浮在水溶液中，然后将微球悬浮液离心，离心条件 10000r/min、20min，倒掉上清液，加入 1ml 超纯水，然后用超声波超声分散均匀；

（b）活化的免疫荧光微球交联标记抗体，取1ml 活化后的免疫荧光微球悬浮液，超声分散均匀，然后边搅拌边滴加抗体，加入抗体后，反应30s-120s后，再到超声波上超声20-40秒，然后再反应1小时，加牛血清白蛋白BSA进行封闭1小时，将封闭好的微球进行离心，速度为10000r/min，15min，将免疫荧光微球缓冲液加入到离心后的微球中，使微球分散均匀，待用；

（c）采用缓冲液稀释步骤（b）的免疫荧光微球交联标记抗体获得免疫荧光抗体溶液，用免疫荧光抗体溶液喷涂于玻璃纤维垫，制得免疫荧光玻璃纤维膜；

（d）将硝酸纤维素膜用聚乙二醇丙三醇处理液预处理后，喷点与油酸修饰的硫化锌纳米颗粒结合的GDF15抗体作为检测线，喷点羊抗鼠IgG抗体作为质控线，制得免疫硝酸纤维素膜；

（e）将预处理的样品垫、步骤（c）制备的免疫荧光玻璃纤维膜、步骤（d）制备的免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上，切裁制得检测试剂条，最后将检测试剂条装入塑料外壳。

2.根据权利要求1所述的GDF15快速定量荧光微球检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（b）所述的缓冲液由 Tris-HCL 液、蔗糖、海藻糖、牛血清白蛋白 BSA组成，pH 值 8.5，其中 Tris-Hcl 浓度为 0.02mol/L，蔗糖浓度为 5~20%，海藻糖浓度为 1~5%，牛血清白蛋白 BSA 浓度为 0.5~1% 。

3.根据权利要求1 所述的GDF15快速定量荧光微球检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（d）所述的将硝酸纤维素膜用聚乙二醇丙三醇处理液预处理是：用聚乙二醇丙三醇处理液浸泡硝酸纤维素膜1 h，并慢速振荡摇晃，取出后用蒸馏水清洗3遍，最后在真空干燥箱中干燥。

4.根据权利要求1或3所述的GDF15快速定量荧光微球检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（d）所述的聚乙二醇丙三醇处理液由聚乙二醇丙三醇稀释到浓度为0.5%组成，经0.22μm滤膜过滤，备用。

5.根据权利要求1或3所述的GDF15快速定量荧光微球检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（d）所述的聚乙二醇丙三醇处理液由聚乙二醇丙三醇和多聚赖氨酸混合组成，其中聚乙二醇丙三醇浓度为0.5%，多聚赖氨酸浓度为0.5%，经0.22μm滤膜过滤，备用。

6.根据权利要求1或3所述的GDF15快速定量荧光微球检测装置的制备方法，其特征在于：步骤（d）所述的聚乙二醇丙三醇处理液由聚乙二醇丙三醇、多聚赖氨酸和PEG20000混合组成，其中聚乙二醇丙三醇浓度为0.5%，多聚赖氨酸浓度为0.5%，PEG20000浓度为0.1%，经0.22μm滤膜过滤，备用。