[发明专利]一种聚乳酸-人脂肪干细胞胶微球颗粒的制备方法

说明书

本发明公开了一种聚乳酸‑人脂肪干细胞胶微球颗粒的制备方法，该颗粒包含聚乳酸和人脂肪干细胞胶。本发明利用抽取的人腹部脂肪组织，提纯乳化后破碎成纳米大小的颗粒，将得到的脂肪微球颗粒与预处理好的聚乳酸微球按比例混合，制备成聚乳酸‑人脂肪干细胞胶微球颗粒复合物。本复合物制备便捷，30分钟内即可制备完成。并且该复合物可以显著提高填充性脂肪存活率，降低脂肪纤维化和钙化。根据本发明所述的聚乳酸‑人脂肪干细胞胶微球颗粒具有多种生物学活性，在脂肪填充，等组织工程修复领域具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及医学脂肪移植技术领域，涉及一种新型的聚乳酸-脂肪微球混合颗粒制备方法。

背景技术

人体脂肪含有丰富的干细胞和表皮生长因子，神经保护因子等活性物质，目前已经在临床组织再生与修复领域被广泛的应用。在2016年鲁峰教授团队首次研发了脂肪干细胞胶(SVF-gel)[1]，它主要是通过离心的方法去除脂肪组织的油滴，得到富含脂肪干细胞和细胞外基质(如胶原蛋白，弹性蛋白和粘多糖等)产物，研究发现SVF-gel具有强大的组织再生和修复能力。研究还发现SVF-gel中含有大量的细胞因子，如VEGF，GDNF，HGF，FGF等[2]。SVF-gel的提取方法首先需要提前将油滴分离出来，粗提的SVF-gel需要两次离心，第一次离心去除沉淀脂肪中含有的肿胀液，第二次离心去除成熟脂肪细胞裂解释放的油滴，还需要注射器反复推注乳化，将样品破碎后，最终呈现出的外观是胶冻样。在临床的操作中发现SVF-gel的提取过于繁琐，一套操作下来大概需要几个小时，对于自体填充手术来说时间太久，加大了污染的风险。另外还发现反复推注并不能完全破碎脂肪块颗，在使用时填充的脂肪块不容易获得血供，容易钙化导致手术失败。因此有效快速的制备小颗粒的SVF-gel，目前是临床迫在眉睫需要解决的问题。本发明制备成的聚乳酸-脂肪微球颗粒复合物，30分钟内即可制备，并可以显著提高填充性脂肪存活率，降低脂肪纤维化和钙化。在脂肪填充，等组织工程修复领域具有很好的应用前景。

发明内容

本发明的首要目的是提供一种快速制备聚乳酸-脂肪干细胞胶微球颗粒的制备方法，本发明的次要目的是提供一种40um左右的聚乳酸颗粒。

为实现上述法发明目的，本发明的技术方案如下：

人脂肪干细胞胶微球颗粒的制备方法，包括以下步骤：

(1)将存在50mL注射器内的新鲜脂肪组织，进行800rpm/min离心5分钟，离心后的取中间脂肪细胞层。

(2)取出的脂肪细胞层利用2个螺旋注射器及乳化器进行乳化操作。将两个螺旋注射器通过乳化器连接，拉直最大量程，然后恢复脂肪刻度，反复推拉20次。该步骤使用的螺旋注射器型号为10ml。

(3)将乳化后的样品进行800rpm/min离心5分钟，离心后的取下层的脂肪组织即脂肪干细胞胶。

(4)制备脂肪干细胞胶微球颗粒：利用超声破碎仪进行破碎，条件为40％强度，10秒间隔，每次10秒，处理3分钟。处理完的样品为脂肪干细胞胶微球颗粒。该步骤使用的超声破碎仪型号为SONICS Uibrace II^TM。

聚乳酸微球颗粒的制备方法，包括以为步骤：

(1)利用聚乳酸为原料，用纳米粉碎机进行粉碎，粉碎时间大约20分钟。

(2)将破碎的聚乳酸颗粒放入鼓风干燥机内烘干，烘干温度55℃大约30分钟。

(3)聚乳酸颗粒利用400目筛选，收集筛选后的聚乳酸颗粒，收集后用无菌水溶解。

(4)将制备的聚乳酸颗粒利用超声破碎仪进行破碎，条件为60％强度，10秒间隔，每次30秒，处理5分钟。处理完的样品为聚乳酸微球颗粒。该步骤使用的超声破碎仪型号为SONICS UibraceII^TM。