[发明专利]一种靶向测序试剂盒和方法在审
| 申请号： | 202010372321.X | 申请日： | 2020-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN111560422A | 公开（公告）日： | 2020-08-21 |
| 发明（设计）人： | 张鹏;唐春花;邢宽;何志健;谢珍;倪海钰;周权;何贵伦;安雪茹;李平;江晓琴 | 申请（专利权）人： | 南京实践医学检验有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 南京瑞华腾知识产权代理事务所(普通合伙) 32368 | 代理人： | 梁金娟 |
| 地址： | 210000 江苏省南京市江北新区*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 靶向 试剂盒 方法 | ||
1.一种靶向测序试剂盒，其中包括DNA聚合酶、dNTP酶、提取核酸的试剂、目的片段扩增试剂、阴性对照、阳性对照。
2.根据权利要求1所述的一种靶向测序试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括纯化试剂和目纯化产物定量试剂。
3.根据权利要求1所述的一种靶向测序试剂盒，其特征在于：所述DNA聚合酶浓度为13-15μM。
4.根据权利要求1所述的一种靶向测序试剂盒，其特征在于：所述dNTP酶浓度为140-150μM。
5.根据权利要求1所述的一种靶向测序试剂盒，其特征在于：所述待测样本包括全血、血清、血浆和组织样品；所述组织样品包括石蜡包埋组织、新鲜组织和冰冻切片。
6.根据权利要求1所述的一种靶向测序试剂盒，其特征在于：PCR产物末端修补和末端加polyA反应液、连接barcode接头反应液、barcode产物纯化试剂、文库富集试剂和文库纯化试剂。
7.根据权利要求1所述的一种靶向测序试剂盒，其特征在于：所述PCR产物末端修补和末端加polyA反应液包括：KAPA End RepairA-Tailing Buffer和KAPA End RepairA-Tailing Enzyme；
所述连接barcode接头反应液包括：Ligation Buffer、DNA连接酶和PKR Y TypeAdapter Kit Index X；
所述barcode产物的纯化试剂包括XP Beads；
所述文库富集试剂包括：2X KAPA HiFi HotStart ReadyMix和10XLibraryAmplification Primer Mix；
所述文库纯化试剂包括：XP Beads。
8.一种根据权利要求1所述的靶向测序方法，其特征在于：按照先后顺序包括以下步骤：
步骤一：样本DNA获取：通过提取核酸的试剂对样本进行处理，获得待测样本的DNA；
步骤二：目的片段扩增：以待测样本的DNA为模板，通过设计的引物扩增需要的DNA片段；
步骤三：对上述步骤中DNA片段进行纯化处理；
步骤四：对于纯化后的目的片段进行定量；
步骤五：文库建库：包括PCR产物末端修补和末端加polyA、连接barcode接头、barcode产物纯化、文库富集、文库纯化的步骤；
步骤六：测序。
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