[发明专利]一种水痘—带状疱疹病毒疫苗制备方法

权利要求书

1.一种水痘—带状疱疹病毒疫苗制备方法，其特征在于，具体制备步骤包括：将收获得到的细胞液进行离心分离；

所述离心分离采用UniFuge一次性桶状碗体离心机。

2.根据权利要求1所述的一种水痘—带状疱疹病毒疫苗制备方法，其特征在于，所述离心分离包括：将所述收获得到的细胞液加入容器中，连接UniFuge一次性桶状碗体离心机，于离心力1500～3000g，每分钟按1.5～3L/min泵入细胞悬液条件下，进行离心分离，离心结束后使用0.01mol/L磷酸盐缓冲溶液，重复洗涤2～3个离心机腔体体积。

3.根据权利要求1所述的一种水痘—带状疱疹病毒疫苗制备方法，其特征在于，所述具体制备步骤包括：细胞复苏；细胞传代；病毒接种；收获得到细胞液；离心分离。

4.根据权利要求3所述的一种水痘—带状疱疹病毒疫苗制备方法，其特征在于，所述细胞复苏包括：将MRC-5细胞复苏传代，细胞生长液为含10～20％新生牛血清的M199-801培养液，将细胞管解冻，融化后的细胞悬液无菌吸入到10mL离心管中，补加生长液，1000rpm离心5分钟；弃上清液，加入细胞生长液重悬细胞，转移到T25细胞瓶中，补加培养液，恒温培养3～4天后，得复苏细胞液。

5.根据权利要求4所述的一种水痘—带状疱疹病毒疫苗制备方法，其特征在于，所述MRC-5细胞为来源于ATCC的工作细胞库MRC-5细胞。

6.根据权利要求3所述的一种水痘—带状疱疹病毒疫苗制备方法，其特征在于，所述细胞传代包括：先将盛放有复苏细胞液的瓶内液体吸弃，加入磷酸盐缓冲溶液液洗涤细胞表面，再加入EDTA-Trypsin消化液，直至覆盖细胞，细胞瓶平放消化1～3分钟，待细胞面肉眼观察出现间隙时，弃尽消化液，加入细胞培养液，吹打细胞面，使细胞分散，按1:4～1:8传代比例进行传代，补加入至0.2～0.3mL/cm²的5～10％新生牛血清pH7.2～7.4M199-801培养液，恒温培养。

7.根据权利要求3所述的一种水痘—带状疱疹病毒疫苗制备方法，其特征在于，所述病毒接种包括：待所述传代培养过程中，细胞单层融合度为80～90％时，取水痘工作种子批进行感染，感染复数为0.001～0.01，维持液为的2～5％新生牛血清pH7.2～7.4M199-801培养液，维持液量为0.2～0.3mL/cm²，恒温培养。

8.根据权利要求3所述的一种水痘—带状疱疹病毒疫苗制备方法，其特征在于，所述收获得到细胞液包括：待病毒接种后，恒温培养过程中，细胞的CPE达到50％时收获细胞，加入磷酸盐缓冲液洗涤细胞表面，然后按0.1mL/cm²加入EDTA-Trypsin消化液，直至覆盖细胞，细胞瓶平放消化1～3分钟，待细胞面肉眼观察出现间隙时，摇晃至细胞全部脱落。