[发明专利]一种湖羊血清提取工艺

权利要求书

1.一种湖羊血清提取工艺，其用于对湖羊莱姆病血清抗体的提取，其特征在于，其包括步骤：

(1)原液制备：将患病湖羊莱姆病血清菌株接种到固体培养基；

(2)菌液灭活：提取上述固体培养基的患病湖羊新鲜毒液，低温离心，取上清液真空冷冻干燥；混合同类型的干燥湖羊血液作为免疫抗原，测定疾病病毒传染力；将所述免疫抗原用0.2-0.25μm滤膜过滤除菌，并进行灭活处理；将所得混合菌液添加0.2％甲醛，放37℃摇床灭活24h，摇床速度控制在120r/min，灭活后进行灭活检验，确认无菌生长后，得到灭活菌液；

(3)免疫抗体制备：将灭活后的菌液8000r/min，离心10min，去除上清，留下菌体，达到去除毒素和浓缩的效果，将菌体用生理盐水冲下，配置成1000亿cfu/mL的抗原液；

(4)免疫：试血，用抗原液血清对健康湖羊进行免疫；

(5)采血：免疫血浆效价达到要求时进行采血，并离心分离血浆；

(6)精制血清：从湖羊血浆提取免疫球蛋白，收集抗体，脱盐、冻干，即得所述具有莱姆病血清抗体的血清。

2.根据权利1所述的一种湖羊血清提取工艺，其特征在于，步骤(5)中，离心的条件为2000-2500rpm，离心时间为15-30min。

3.根据权利1所述的一种湖羊血清提取工艺，其特征在于，步骤(6)从动物血浆提取免疫球蛋白时，包括步骤：

S1、取湖羊超免疫血浆，加入硫酸铵，使硫酸铵终质量分数为45-50％，待硫酸铵全部溶解后离心，取沉淀；

S2、加水复溶，再次加入硫酸铵盐析，取沉淀加水溶解，透析、离心，取上清液得免疫球蛋白溶液；

S3、向免疫球蛋白溶液中加水至动物免疫血浆的初始体积，加入甲苯，用酸调节剂调节溶液pH值至3.6-4.5，加入胃蛋白酶，25℃水浴条件下酶解3-5h，然后用碱调节剂调节pH值至5.0-5.4，50℃下保温30min，待温度降至45℃以下，取上清液纯化，得具有莱姆病血清抗体的血清溶液。

4.根据权利3所述的一种湖羊血清提取工艺，其特征在于，所述S1步骤中，用硫酸铵首次盐析过程中离心的条件为3000-4000rpm，离心时间为30-60min。

5.根据权利3所述的一种湖羊血清提取工艺，其特征在于，所述S2步骤中，用硫酸铵再次盐析时，使硫酸铵最终质量分数为33％；透析时，采用截留分子量大于500的透析袋透析至少三次，透析时间为30min；离心的条件为4000-6000rpm，离心时间为20-30min。

6.根据权利3所述的一种湖羊血清提取工艺，其特征在于，所述S3步骤中，甲苯的加入量为使甲苯在体系中的终质量分数为0.2％；所述胃蛋白酶的加入量为0.2g/L溶液；所述酸调节剂为5mol/L盐酸；所述碱调节剂为4mol/L NaOH溶液。

7.根据权利3所述的一种湖羊血清提取工艺，其特征在于，所述S3步骤中，所述上清液纯化时，用柱层分离除去杂蛋白；柱层析过程中，用1.0mol/L硫酸铵溶液和0.05mol/L磷酸钠溶液淋洗1.5个柱床体积后，用注射用水进行梯度洗脱，收集活性峰，即得纯化上清液。

8.根据权利7所述的一种湖羊血清提取工艺，其特征在于，疏水柱层析之前，用2mol/L硫酸铵溶液将层析液的电导率调节至50-70ms/cm。