[发明专利]RT-RAA荧光法检测SARS-CoV-2的引物、探针、试剂盒和检测方法

权利要求书

1. 一种RT-RAA荧光法检测SARS-CoV-2 的引物，其包括如SEQ ID NO.2所示序列的引物和如SEQ ID NO.3所示序列的引物：

5’- CTTCAACCTAGGACTTTTCTATTAAAATATAATG -3’ （SEQ ID NO.2）；

5’- GTTGGTTGGACTCTAAAGTTAGAAGTTTGATAG -3’ （SEQ ID NO.3）。

2. 一种RT-RAA荧光法检测SARS-CoV-2 的探针，其包括如SEQ ID NO.4所示序列的探针，或在SEQ ID NO.4所示序列基础上经修饰的探针：

5’-CCATTACAGATGCTGTAGACTGTGCACTTGACCCTCTCTCAGAAACAAAGTGTACG -3’（SEQ IDNO.4）；

其中，所述修饰为：

探针序列离5’端碱基数35bp的位置上的碱基T采用荧光报告基团FAM修饰，探针序列离5’端碱基数39bp的位置上的碱基T用荧光淬灭基团BHQ修饰，探针序列离5’端碱基数37bp的位置上的碱基T用四氢呋喃残基（THF）替换。

3. 一种RT-RAA荧光法检测SARS-CoV-2 的试剂盒，其包含：权利要求1所述的引物，和/或权利要求2所述的探针。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中还包括RT-RAA基础荧光通用反应试剂和反应缓冲液，所述缓冲液包括Tris-HCl缓冲液、MgAc和PEG10000。

5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其中还包括阳性质控品和阴性质控品。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中，所述阳性质控品为含SARS-CoV-2的特异性基因序列，所述阴性质控品为不含SARS-CoV-2的特异性序列的RT-RAA扩增体系。

7.权利要求1所述的引物或权利要求2所述的探针或权利要求3-6中任一项所述的试剂盒在体外检测样品中是否存在新型冠状病毒SARS-CoV-2的应用，所述应用为非诊断目的的。

8.根据权利要求7所述的应用，其中，所述引物在反应体系中的终浓度独立地为0.42pM/μl，所述探针在反应体系中的终浓度为0.24pM/μl。

9. 根据权利要求8所述的应用，其中，反应体系中还包括RT-RAA基础荧光通用反应试剂和反应缓冲液，所述反应缓冲液包括以下含量组分：浓度为450mM，pH 为7.6的Tris-HCl缓冲液、浓度为260mM的MgAc和10% W/V的PEG10000。

10.根据权利要求9所述的应用，其中，检测包括以下步骤：

S1：提取待测样品RNA；

S2：反应体系配制：将反应缓冲液加入到RT-RAA基础荧光通用反应试剂中，使其充分溶解并混匀；加入已提取的待测样品RNA为模板；

S3：将上述反应体系混匀，放入荧光检测仪器中进行实时RAA荧光反应；所述实时RT-RAA荧光法反应条件为：反应温度37-42℃，反应时间5～15min；

S4：根据荧光检测仪器检测到信号分析结果。

11. 根据权利要求10所述的应用，其中，步骤S2中，所述反应缓冲液包含使用浓度为450mM、pH 7.6的Tris-HCl 缓冲液；260mM的MgAc；10％W/V的PEG10000，终浓度为0.24pM/μl的探针，和终浓度分别为0.42pM/μl的上游引物和下游引物，余量为作为溶剂的水；

步骤S3中，所述实时RT-RAA荧光法反应条件为：反应温度为39℃，反应时间为10min。