[发明专利]一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法有效
| 申请号： | 202010374166.5 | 申请日： | 2020-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN111575244B | 公开（公告）日： | 2021-07-23 |
| 发明（设计）人： | 赵永强;蒋世鹏;吴建华;金晓中;王剑飞;孔繁荣;杨骏宇;朱实惠;唐阳;李凡;望朔;杨文彬 | 申请（专利权）人： | 江苏金迪克生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N7/02;A61K39/205;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京哌智科创知识产权代理事务所(普通合伙) 11745 | 代理人： | 何浩 |
| 地址： | 225300*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 vero 细胞 残留 dna 狂犬病 疫苗 原液 制备 方法 | ||
1.一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法，其特征在于，具体制备步骤包括：用玻璃纤维滤芯进行过滤；所述玻璃纤维滤芯孔径为0.6～1.0μm；具体制备步骤包括：
(1)细胞复苏；
(2)细胞传代；
(3)生物反应器培养；
(4)接种病毒；
(5)病毒收获；
(6)Mustang Q XT140膜层析处理；
(7)超滤浓缩及灭活；
(8)Sepharose 4FF凝胶层析；
所述Mustang Q XT140膜层析处理时的流速为1300～1500mL/min；所述（5）、（8）步骤都包含所述用玻璃纤维滤芯进行过滤的步骤。
2.根据权利要求1所述的一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法，其特征在于，所述具体制备步骤包括：用超滤膜浓缩后，用缓冲液进行洗滤。
3.根据权利要求2所述的一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。
4.根据权利要求1所述的一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法，其特征在于，所述Sepharose 4FF凝胶层析为：按柱床体积5～10％进行上样，以0.01M磷酸盐缓冲液洗脱，收集蛋白峰。
5.根据权利要求3或4任一项所述的一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液由以下重量份数的原料组成：8～10份氯化钠，0.2～0.4份氯化钾，3～5份十二水合磷酸氢二钠，0.2～0.4份磷酸氢二钾，800～1000份水。
6.根据权利要求1所述的一种低Vero细胞残留DNA狂犬病疫苗原液的制备方法，其特征在于，所述病毒收获为：当抗原含量≥0.3IU/mL时，开始收获，并进行灌流补液，连续收获连续补液；并将收获的所述病毒液用玻璃纤维滤芯进行过滤，去除细胞碎片。
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