[发明专利]一种靶向脑胶质母细胞瘤的双模态纳米探针及其制备方法

权利要求书

1.一种靶向脑胶质母细胞瘤的双模态纳米探针，其特征在于，包括以下成分：二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇DSPE-PEG2000 AMINE、超顺磁纳米氧化铁SPIONs、Cy7-NHS分子、靶向多肽和/或其反式镜像结构；其中，

所述靶向多肽为L型氨基酸组成的靶向多肽ANG；靶向多肽的反式镜像结构为D型氨基酸组成的靶向多肽的反式镜像序列^DANG；

所述的L型氨基酸组成的靶向多肽ANG为Ac-TFFYGGSRGKRNNFKTEEY-OH；所述的D型氨基酸组成的靶向多肽的反式镜像序列^DANG为Ac-YEETKFNNRKGRSGGYFFT-OH；

所述的双模态纳米探针为Peptides/Cy7-PEG-DSPE-SPIONs，并且所述的Peptides/Cy7-PEG-DSPE-SPIONs包括ANG/Cy7-PEG-DSPE-SPIONs和/或^DANG/Cy7-PEG-DSPE-SPIONs；

所述的双模态纳米探针是以超顺磁纳米氧化铁SPIONs为核心，在SPIONs表面修饰近红外荧光分子Cy7、以及靶向多肽和/或其反式镜像结构作为配体构建的能够靶向脑胶质母细胞瘤的磁共振/荧光双模态纳米探针；

并且所述的双模态纳米探针的制备方法包括如下步骤：

S1：制备SPIONs，并通过亲疏水作用将DSPE-PEG2000 AMINE分子包被于SPIONs表面，对带有氨基的PEG化磁性纳米颗粒超声分散预处理，使纳米颗粒在水溶液中均匀分散；通过10KDa超滤管将磁性纳米颗粒水溶液替换为pH＝8的0.02M硼酸盐缓冲液；

S2：对L型氨基酸组成的靶向多肽ANG和/或D型氨基酸组成的靶向多肽的反式镜像序列^DANG的羧基进行活化；

S3：将活化后的靶向多肽ANG和/或D型氨基酸组成的靶向多肽的反式镜像序列^DANG与NH₂-PEG-DSPE-SPIONs置于摇床反应2h，结束后用30KDa超滤管分离未反应的靶向多肽，得到PEG化磁性纳米颗粒Peptides/PEG-DSPE-SPIONs溶液；

S4：将Cy7-NHS分子加入上述PEG化磁性纳米颗粒溶液中，4℃避光振荡过夜；孵育结束后，用超滤管去除未反应的染料分子Cy7-NHS，得到Peptides/Cy7-PEG-DSPE-SPIONs探针。

2.根据权利要求1所述的靶向脑胶质母细胞瘤的双模态纳米探针，其特征在于，所述的双模态纳米探针为^DANG/Cy7-PEG-DSPE-SPIONs。

3.根据权利要求1所述的靶向脑胶质母细胞瘤的双模态纳米探针的制备方法，其特征在于，采用水热法合成SPIONs。

4.根据权利要求3所述的靶向脑胶质母细胞瘤的双模态纳米探针的制备方法，其特征在于，采用水热法合成SPIONs包括如下步骤：

S11：将乙酰丙酮铁、1,2-已二醇、油酸、油酰胺和苄醚混合放入圆底烧瓶中，通入氩气去除反应体系中的空气并搅拌；

S12：将混合物加热到200℃，恒温2h，再加热至300℃，回流1h；

S13：将得到的黑色混合物冷却到室温，用乙醇沉淀产物，离心去除溶剂，并将产物分散至已烷得到SPIONs溶液；

S14：将获得的SPIONs溶液离心去除聚集物。

5.根据权利要求1所述的靶向脑胶质母细胞瘤的双模态纳米探针的制备方法，其特征在于，对L型氨基酸组成的靶向多肽ANG和/或D型氨基酸组成的靶向多肽的反式镜像序列^DANG的羧基进行活化包括如下步骤：

S21：取L型氨基酸组成的靶向多肽ANG和/或D型氨基酸组成的靶向多肽的反式镜像序列^DANG，用pH＝5.5的0.02M的MES缓冲液溶解；

S22：加入EDC分子，NHS分子，恒温摇床180rpm、25℃反应25min对靶向多肽序列的羧基进行活化；

S23：用2KDa超滤管去除未反应的EDC和NHS。