[发明专利]一种经大分子量PEG修饰的抗HIV多肽及其制备方法和用途

说明书

本发明涉及经PEG修饰的抗HIV多肽。具体而言，在C34多肽的N端、C端或第10位添加半胱氨酸，并通过Michael加成反应将具有马来酰胺修饰的聚乙二醇基团偶联至所述半胱氨酸，对C34多肽进行PEG化修饰，其中，PEG部分的分子量为10000以上，优选为10000‑100000，更优选为10000‑50000。该经修饰的C34肽具有明显增加的水溶性和大鼠血浆半衰期，更易进入淋巴结且对急性感染SHIV_SF162P3的恒河猴具有较强的抗HIV病毒活性。本发明还涉及该经PEG修饰的抗HIV多肽的制备方法及用途。

技术领域

本发明属于生物制药领域，涉及经聚乙二醇(PEG)修饰的抗HIV多肽及其制备方法和用途。

背景技术

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的具有极高致死率的疾病，HIV会导致全身免疫系统的严重损害，给人类生命健康安全造成极大威胁。自1981年首次被发现以来，其防治一直没能获得有效的解决。目前在全球范围内艾滋病已经呈现出了爆发性流行的趋势，全世界HIV携带者已达到3400万人左右。据我国卫生部统计估算，截至2011年底，中国存活艾滋病病毒携带者和艾滋病病人(PLHIV)已达到78万人(62～94万人)。由于该病毒的高突变率，目前尚未寻找到有效的治愈艾滋病的方法。

目前上市的HIV的治疗性药物多为针对病毒逆转录酶、整合酶、蛋白酶等的一些小分子酶抑制剂。由于HIV的超高突变性，使得这些小分子特效药物正在逐渐退化为常效、甚至无效药物。近年来，随着HIV入侵宿主细胞分子机制的逐步阐明，抑制该过程的多肽药物逐渐成为艾滋病防治领域的研究热点。这类多肽药物例如第一代侵入抑制剂C34和T20，其作用机理在于可特异性结合HIV囊膜上的融合蛋白，从而抑制病毒进入宿主细胞。

C34分子被用作第一代融合抑制剂，其存在水溶性差和半衰期短等问题，许多学者曾对C34分子进行多种基团修饰来改善这些问题，但关于大分子修饰的研究较少。

本课题组在专利申请201810547641.7公开了经修饰的C34肽，其中，经PEG化修饰的C34肽的水溶性由≤1mg/mL提高至3mg/mL以上，从而延长了C34分子在大鼠体内的血浆半衰期。该研究主要集中在PEG分子量为700-5000的修饰。

本发明人经过进一步的研究发现，以更大分子量的PEG对C34肽进行PEG修饰，可使其水溶性获得很大程度的改善，在SD大鼠体内的血浆半衰期得到明显延长，且对急性感染SHIV病毒的恒河猴有显著的保护效果。

发明内容

在第一方面，本发明提供了一种经修饰的C34肽，所述经修饰的C34肽具有式I的结构：

Ac-B_pWMEWDREINN_cB_dYTSLIHSLIEESQNQQEKNEQELLB_q-NH₂式I；

其中，c为0或1；d为0或1；p为0或1；q为0或1；c和d不同时为0；p、q和d不同时为0；Ac表示式I肽链的N端带有乙酰化修饰；NH₂表示式I肽链的C端带有酰胺化修饰；B为式II的基团

式II中，Z为半胱氨酸，所述半胱氨酸通过酰胺键与式I肽链中的氨基酸相连；Y为式III的基团：

mPEG 式III；

式III中，m为甲氧基，

其中，所述PEG的分子量为10000以上。

在优选地实施方式中，所述PEG的分子量为约10000-100000，优选为10000-50000。

在第二方面，本发明提供了制备如第一方面所述的经PEG修饰的C34肽的方法，所述方法包括：