[发明专利]侵润宫颈恶性肿瘤的T细胞所靶向的用于疫苗的HPV表位

说明书

本发明涉及对HPV特异性E6和E7癌蛋白具有特异性的新的CD4⁺和CD8⁺T细胞表位，涉及包含这些新的T细胞表位的肽，以及涉及包含这些肽、用于预防和/或治疗HPV相关疾病的(疫苗)组合物。优选的表位由侵润宫颈瘤病变的T细胞或由来自引流淋巴结的T细胞识别，并由HLA‑DQ或HLA‑DP分子或HLA‑B呈递。

发明领域

本发明涉及医药和免疫学领域。特别涉及可用于预防、治疗和/或诊 断HPV相关疾病的新的HPV表位。

发明背景

宫颈癌是全世界第二高发的癌症(Bosch et al.2003)。在大约三分之二 的患者中，宫颈癌的致病原因是高风险的16型和18型人乳头状瘤病毒 (human papilloma virus,HPV)(Bosch et al.1995,Munoz et al.2003)。HPV 基因组编码2种致癌蛋白，E6和E7，由于它们是恶性细胞表型的发作和 维持所需的，因此其在高级宫颈病变和宫颈癌中组成性表达(Zur Hausen, 1996)。

这些癌蛋白的肿瘤特异性表达，以及在几乎二分之一的宫颈癌患者 的外周血中检测到低水平的E6-和E7特异循环性T细胞的存在(de Jong et al.2004,van der Berg etal.2001,Welters et al.2003,Welters et al.2006， Ressing et al.1996,Bontkes etal.2000,Luxton et al.1996)，表明它们可能 充当肿瘤排斥抗原。然而，循环的HPV特异性T细胞的存在并不意味着 它们有助于抗肿瘤应答。为了控制疾病，这些T细胞应当至少能够深入 肿瘤位点。事实上，一定比例的宫颈癌为淋巴细胞所侵润(Bethwaite et al. 1996,Chao et al.1999,Piersma et al.2007)，但或许是由于从肿瘤组织中建 立T细胞培养物相对困难，因而对侵润这些宫颈肿瘤的T细胞的特异性 和类型尚缺少透彻的了解。然而，一些早期的先行者能够从肿瘤中分离 到HPV特异性的肿瘤侵润性淋巴细胞(tumorinfiltrating lymphocytes, TIL)，结果是鉴定出HPV16的两个单独的CD8⁺ T细胞表位(Evans et al. 1997,Oerke et al.2005)和两个低流行高风险HPV59和HPV33亚型的CD4 T细胞表位(Hohn et al.1999,Hohn et al.2000)。然而，迫切需要对侵润宫 颈组织侵润性淋巴细胞(cervical tissue-infiltrating lymphocytes)开展更大规 模的研究，以便了解HPV特异的适应性免疫应答在宫颈癌中的作用和角 色。此外，这将允许合理地设计成功的免疫干涉策略。

最近的研究表明，两种细胞因子即IL-7和IL-15在CD4⁺和CD8⁺效 应记忆T细胞(effector memory T cells)的扩增和存活中发挥主要作用。 IL-7为效应T细胞提供存活信号(Li et al.2003)。IL-15是启动T细胞分裂 的重要生长因子，并且与通常用于扩增TIL培养物的IL-2相反，其不限 制T细胞的连续扩增(Li et al.2001)。而且，IL-15也能作为CD8(⁺)记忆T 细胞的抗原非依赖性激活剂(Liu et al.2002)。总之，IL-7和IL-15能够与非常高效的效应记忆T细胞一起扩增，而中枢记忆T细胞的应答性更小 并且天然T细胞不能对这些细胞因子的刺激作出应答(Geginat et al.2001, McKinlay et al.2007,Bacchetta et al.2002)。

以往的许多研究已经报道了II型MHC(MHC class II)限制来自外周 血单核细胞(PBMC)的T细胞识别由HPV16和/或对E7蛋白的序列所组 成的合成肽。