[发明专利]一种恢复水稻OsCYP704B2突变体雄性育性的表达盒、载体及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种用于驱动DNA在植物花药中表达的启动子，其特征在于，其具有如下任一种核苷酸序列：

(1)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

(2)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列经一个或多个碱基的替换、插入或缺失得到的具有驱动DNA在植物花药中表达功能的核苷酸序列；

(3)在严格条件下能够与如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。

2.含有权利要求1所述的启动子的表达盒。

3.根据权利要求2所述的表达盒，其特征在于，还包括水稻OsCYP704B2基因或水稻OsCYP704B2基因的突变体，所述水稻OsCYP704B2基因的CDS序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根据权利要求3所述的表达盒，其特征在于，所述水稻OsCYP704B2基因的突变体具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列的第660位A突变为C，和/或，如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列的第1032位G突变为A的核苷酸序列。

5.根据权利要求3或4所述的表达盒，其特征在于，所述表达盒还包括水稻OsCYP704B2基因的3’-UTR；

所述水稻OsCYP704B2基因的突变体为将如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列的第660位A突变为C、第1032位G突变为A、第348位G突变为C、第525位A突变为G、第717G突变为C、第888C突变为G、第1206G突变为C、第1335C突变为G、第1422G突变为C、第1428G突变为C的核苷酸序列；

优选地，所述表达盒的序列如SEQ ID NO.3所示。

6.根据权利要求3～5任一项所述的表达盒，其特征在于，所述表达盒为在如SEQ IDNO.3所示的序列经如下任意一种或多种改造得到：

(1)在如SEQ ID NO.3所示的序列的5’端添加多克隆位点；

(2)在如SEQ ID NO.3所示的序列的5’-UTR和起始密码子之前添加酶切位点；

(3)在如SEQ ID NO.3所示的序列的终止密码子与3’UTR之间添加酶切位点；

(4)在如SEQ ID NO.3所示的序列的3’端添加多克隆位点；

优选地，所述表达盒的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

7.含有权利要求1所述的启动子或权利要求2～6任一项所述的表达盒的生物材料，其特征在于，所述生物材料包括载体、宿主细胞或工程菌。

8.权利要求1所述的启动子或权利要求2～6任一项所述的表达盒或权利要求7所述的生物材料的如下任意一种的应用：

(1)在驱动基因在植物花药中表达的应用；

(2)在制备转基因植物中的应用；

(3)在植物育性恢复中的应用；

(4)在制备隐形雄性核不育植物中的应用；

(5)在植物遗传育种或种质改良中的应用；

(6)在植物杂交制种中的应用。

9.用于检测携带权利要求4～6任一项所述表达盒的水稻的方法，其特征在于，以待测水稻的基因组为模板，采用如下(1)或(2)的引物组合进行PCR扩增，采用HaeIII酶切扩增产物，根据酶切产物的片段类型判断待测水稻是否携带权利要求4～6任一项所述的表达盒：

(1)正向引物F1：AGGTCGGGTTTGGGGTT；

反向引物R1：GATGTTGGCAGCGTCGAA；

(2)正向引物F2：AGCTTCGGGGACGACAAGA；

反向引物R2：GCGCCGGAGCTTGTC。

10.用于鉴定OsCYP704B2野生型、OsCYP704B2突变体和OsCYP704B2育性恢复转基因事件的方法，其特征在于，以待测水稻的基因组为模板，采用如下(1)或(2)的引物组合进行PCR扩增，采用HaeIII酶切扩增产物，根据酶切产物的条带类型判断水稻OsCYP704B2基因型：

(1)正向引物F1：AGGTCGGGTTTGGGGTT；

反向引物R1：GATGTTGGCAGCGTCGAA；

(2)正向引物F2：AGCTTCGGGGACGACAAGA；

反向引物R2：GCGCCGGAGCTTGTC；

所述OsCYP704B2育性恢复转基因事件为转化如权利要求4～6任一项所述的表达盒或权利要求7所述的生物材料。