[发明专利]一种用于靶向结肠癌细胞HCT116的核酸适配体及其应用

说明书

本发明公开了一种用于靶向结肠癌的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的DNA片段，所述核酸适配体命名为HCT116‑4‑RFD。本发明筛选得到的核酸适配体无毒性、分子量小、渗透性好、易于合成与标记，可以精准、快速、牢固人源结肠癌HCT‑116细胞裂解液特异蛋白的适配体。在生物医学检测、结肠癌生物标志物发现以及靶向治疗结肠癌方面将有重要的应用价值。

技术领域

本发明属细胞生物技术领域。具体涉及一种结肠癌细胞HCT116的核酸适配体的序列及应用。

背景技术

结直肠癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一，我国结直肠肿瘤发病率处于逐年走高的趋势。国家癌症中心数据显示，2015年中国大陆地区结直肠癌新发病已达到42.92万例，死亡病例约为28.14万例，日均发病和死亡分别为11759例和7710例23。目前在美国进展期结直肠癌5年生存率约为60％。而通过早期筛查可有效降低结直肠癌的发生率和死亡率。T1期的结直肠癌在手术治疗后5年生存率为91％，经内镜下切除后5年生存率可达93％。

适配体(aptamer)是特异识别目标分子的核酸(DNA或RNA)序列。得益于其高特异性和亲和力，适配体已经成为调节细胞表面受体功能的一种很有潜力的选择。与抗体相比较，适配体对目标分子的灵敏度(～10-9M)和特异性(3个数量级的区分度)与之相当，然而适配体的核酸本质决定了其更易于合成、修饰、操作、储备、集成等。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种灵敏度高，专一性强的结肠癌核酸适配体。

本发明的第二个目的是提供结肠癌特异性核酸适配体在与结肠癌相关方面的应用。

为了达到上述目的，本发明提供了一种用于靶向结肠癌的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的DNA片段，所述核酸适配体命名为HCT116-4-RFD。

优选地，所述核酸适配体特异性靶向结肠癌HCT116细胞裂解液。

本发明还提供了上述用于靶向结肠癌的核酸适配体在检测人源结肠癌细胞株HCT-116细胞中的应用。

本发明还提供了上述用于靶向结肠癌的核酸适配体在制备检测结肠癌的试剂盒、分子探针或靶向介质中的应用。

本发明还提供了一种用于检测人源结肠癌细胞株HCT-116细胞的试剂盒，其特征在于，包含上述核酸适配体。

本发明的有益效果：

本发明筛选得到的核酸适配体无毒性、分子量小、渗透性好、易于合成与标记，可以精准、快速、牢固人源结肠癌HCT-116细胞裂解液特异蛋白的适配体。在生物医学检测、结肠癌生物标志物发现以及靶向治疗结肠癌方面将有重要的应用价值。

附图说明

图1.凝胶电泳纯化连接产物图；

图2.凝胶电泳纯化负向筛选产物图；

图3.凝胶电泳纯化PCR产物图；

图4.HCT116-4-RFD对结肠癌HCT116细胞的动力学反应；

图5.HCT116-4-RFD对结肠上皮FHC细胞的动力学反应；

图6.HCT116-4-RFD与临床组织样品进行反应。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

核酸序列的筛选：