[发明专利]一种海洋芽孢杆菌Bacillus sp.JIN118生产胸腺嘧啶的制备方法

说明书

本发明涉及一种海洋芽孢杆菌Bacillus sp.JIN118生产胸腺嘧啶的制备方法，包括以下步骤：(1)将海洋芽孢杆菌Bacillus sp.JIN118活化并发酵，得到发酵液；(2)发酵液离心处理，弃菌体，得到上清；(3)上清液加入等体积乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩得到膏状粗提物；(4)膏状粗提物通过中压制备色谱法进行初级分离，得到粗品；(5)将粗品利用制备型高效液相色谱分离获得胸腺嘧啶纯品。本发明提供了一种发酵周期短、副产物少、高效制备胸腺嘧啶的方法，解决了化学合成法原料难得、昂贵，反应条件苛刻，污染严重等问题，达到了快速有效获得胸腺嘧啶的目的，为大批量工业发酵提供新技术，具有广阔市场前景。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种海洋芽孢杆菌Bacillussp.JIN118生产胸腺嘧啶的制备方法。

背景技术

胸腺嘧啶(C₅H₆N₂O₂)是遗传物质的重要组成部分，是合成抗艾滋病药物AZT、DDT及相关药物的关键中间体，也是合成抗肿瘤，抗病毒药物β-胸苷的起始原料。

胸腺嘧啶具有独特的治疗功效，可以用于治疗胸腺发育不全综合症、运动失调性毛细血管扩张症等免疫缺陷性疾病。国内用于治疗复发性口疮、麻风重症感染等伴有免疫功能低下的疾病。胸腺嘧啶还可用于生化、营养研究及作培养基等，其应用包括：(1)以胸腺嘧啶为模板合成荧光铜纳米簇；(2)作为特异性汞离子吸附剂。

目前胸腺嘧啶多以化学合成的方式得到，但合成技术中存在原料难得、原材料昂贵、反应条件较苛刻，污染严重等缺点。因此建立一种高效、无污染且易分离制备的方法尤为重要。本发明涉及从一种海洋芽孢杆菌Bacillus sp.JIN118的代谢产物中分离纯化获得胸腺嘧啶。

本发明提供了一种发酵周期短、副产物少、高效制备胸腺嘧啶的方法，为大批量的工业发酵提供新技术，具有广泛的市场前景。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种海洋芽孢杆菌Bacillus sp.JIN118生产胸腺嘧啶的制备方法。

本发明的发明构思是：目前化学合成法获取胸腺嘧啶的方法趋于成熟，而合成技术中存在原料难得、原材料昂贵、反应条件较苛刻，污染严重等缺点。因此建立一种高效、无污染且易分离制备的方法尤为重要。本发明涉及从首次一种海洋芽孢杆菌Bacillussp.JIN118的代谢产物中分离纯化获得胸腺嘧啶，并提供了一种发酵周期短、副产物少、高效制备胸腺嘧啶的方法，为大批量的工业发酵提供新技术。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种海洋芽孢杆菌Bacillussp.JIN118生产胸腺嘧啶的制备方法具体为：

(1)将海洋芽孢杆菌Bacillus sp.JIN118进行活化并发酵，得到发酵液；

(2)对发酵液进行离心处理，弃菌体，得到上清液；

(3)上清液加入等体积的乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩得到膏状粗提物；

(4)膏状粗提物通过中压制备色谱法进行初级分离，得到粗品；

(5)将粗品利用制备型高效液相色谱分离获得胸腺嘧啶纯品。

然后按照5％的接种量接种至装有发酵培养基的三角瓶中，30℃、180r/min培养72h。

更进一步的，所述步骤(1)具体包括以下步骤：

(1.1)菌种活化

将保存在-80℃冰箱中的海洋芽孢杆菌Bacillus sp.JIN118涂布于固体培养基上，30℃培养16-24h。固体培养基配方包含：去离子水1L，蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl 10g，琼脂15g。

(1.2)种子液培养