[发明专利]一种体外诱导神经细胞生长的生物支架及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种体外诱导神经细胞生长的生物支架及其制备方法与应用。本发明公开了一种体外诱导神经细胞生长的生物支架的制备方法，该制备方法依次采用多聚赖氨酸溶液和层粘连蛋白溶液进行包被，提高神经细胞神经细胞的存活率。该制备方法制得的生物支架可以给神经细胞进行精确的方向性指导，有利于神经细胞的附着，进一步提高神经细胞的存活率。另外，该生物支架处理过程中未加入有机溶剂，避免有机溶剂给细胞造成伤害，而且所用的材料均有生物相容和生物降解特性。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种体外诱导神经细胞生长的生物支架及其制备方法与应用。

背景技术

国内外诸多课题组都对三维生物支架诱导细胞进行了报道，结果表明生物支架的纤维直径、晶格孔径、排列方向和角度都对细胞的增殖、附着和生长方向有着显著的影响。

目前，采用三维生物支架培养的神经细胞还存在着存活率较低的问题。

发明内容

本发明提供了一种体外诱导神经细胞生长的生物支架及其制备方法与应用，解决了目前三维生物支架培养的神经细胞存活率较低的问题。

其具体技术方案如下：

本发明提供了一种体外诱导神经细胞生长的生物支架的制备方法，包括以下步骤：

将三维生物支架依次采用多聚赖氨酸溶液和层粘连蛋白溶液进行包被，得到体外诱导神经细胞生长的生物支架。

本发明依次采用多聚赖氨酸溶液和层粘连蛋白溶液进行包被，可以提高神经细胞的存活率，该制备方法制得的生物支架可以给神经细胞进行精确的方向性指导，有利于神经细胞的附着，进一步提高神经细胞的存活率。另外，该生物支架处理过程中未加入有机溶剂，避免有机溶剂给细胞造成伤害，而且所用的材料均有生物相容和生物降解特性。

本发明中，三维生物支架的主体材料优选为聚己内酯，所述聚己内酯的分子量为50000。

本发明中，三维生物支架优选以聚己内酯为主体材料，采用近场纺丝装置制得。聚己内酯具有生物相容性和生物降解特性。近场纺丝为物理加热，且制备出的微纳米级纤维具有高空隙率、高面容比和超长连续特性，其制得的三维生物支架与体内细胞外基质的形态类似。采用近场纺丝装置制备三维生物支架的方法为现有技术，此处对三维生物支架的方法不做赘述。

本发明中，三维生物支架的纤维直径为10-20μm，纤维间隔均为100μm。该生物支架的纤维具有较好的均匀性、连续性和方向性。

本发明中，所述多聚赖氨酸溶液中的多聚赖氨酸与所述层粘连蛋白溶液中的层粘边蛋白的质量比为(0.8-4)：1，优选为(1-4)：1，更优选为1.6：1。

本发明中，所述多聚赖氨酸溶液的质量浓度为40-100μg/ml，优选为40μg/ml。多聚赖氨酸低于40μg/ml包被效果下降。

所述层粘连蛋白溶液的质量浓度为25-50μg/ml，优选为25μg/ml。层粘连蛋白低于25μg/ml包被效果下降。。

本发明中，所述多聚赖氨酸溶液包被的时间为2-4h，优选在37℃下包被2h。如果多聚赖氨酸溶液包被时间低于2小时，会造成包被液包被不完整，较少细胞与支架的相互作用效率。

所述层粘连蛋白溶液包被的时间为2-4h，优选在37℃下包被2h。如果层粘连蛋白溶液包被时间低于2小时，会造成包被液包被不完整，较少细胞与支架的相互作用效率。

本发明中，所述多聚赖氨酸溶液和所述层粘连蛋白溶液包被后，均需采用平衡盐溶液进行清洗，除去多余的多聚赖氨酸和层粘连蛋白，以免对细胞生长造成干扰。