[发明专利]一种用于特异性鉴别中国黄果人参的专用引物及PCR方法

说明书

本发明从人参叶绿体短单拷贝区ccsA基因中发掘了中国黄果人参的非同义突变SNP位点，并根据该位点提供了一种用于特异性鉴别中国黄果人参的常规及荧光定量PCR方法。本发明建立的常规PCR方法在一般的分子生物学实验室即可完成检测，建立的荧光定量PCR方法无需对引物进行标记，可以在较短的时间内分析大量的样品，能有效实现黄果人参田间大规模地快速鉴定和筛选。因此，本发明为黄果人参的品种鉴定提供了一种有效的DNA分子标记技术手段，对我国黄果人参的种质资源保护、品种管理和人参产品质量的优化具有重要意义。

技术领域

本发明涉及中药材分子鉴定技术领域，特别是涉及一种用于特异性鉴别中国黄果人参的专用引物及PCR方法。

背景技术

人参(Panax ginseng C.A.Meyer)为五加科多年生草本植物，是传统的名贵中药材，具有丰富的药用和食用价值，有“百草之王”的美誉。人参的主要有效成分是人参皂苷，具有抗衰老、抗疲劳、抗炎等药理作用。人工种植的人参被卫生部正式批准为新资源食品后，极大地推动了人参产业的发展。我国有两千多年的人参栽培历史，栽培人参在人工和自然选择过程中不断发生着遗传变异和分化，主要有大马牙、二马牙、长脖、圆膀圆芦和黄果人参等农家品种。黄果人参是由我国通过系统育种法选育的人参栽培新品种，具有人参皂苷、挥发油、氨基酸等活性成分含量高的特点。黄果人参的成功选育为我国人参的栽培和育种增加了新的宝贵种质资源。但由于不同人参品种的形态学特征在早期的生长发育阶段非常相近，加之我国缺乏快速、准确的人参品种鉴定方法，使得不同的人参品种在各地的栽培群体中混杂分布，导致品种混乱、生产用种混杂。栽培群体的混杂分布严重影响了黄果人参的种质纯度及其产量，因此亟需建立一种黄果人参的分子鉴定方法以保护黄果人参的种质资源，并维持黄果人参质量的稳定性。

由于人参的形态学标记容易受到其生长发育阶段、环境等因素的影响，近年来，各类DNA分子标记技术在人参种内的遗传多样性分析、种质资源鉴定和评价等方面得到了广泛的应用。目前，对于黄果人参的研究主要集中在遗传多样性及遗传结构分析等方面，如任跃英等利用RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)及聚类分析技术研究了黄果与红果、西洋参之间的亲缘关系，王志清等利用RAMP(Random Amplified MicrosatellitePolymorphic)和ISSR(Inter-simple Sequence Repeat)分子标记研究了“福星01”人参与黄果人参等农家人参间的遗传差异，但迄今未见用于黄果人参快速准确鉴定的分子标记方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种用于特异性鉴别中国黄果人参的专用引物及PCR方法。所要解决的第一个问题是：提供一种用于特异性鉴别黄果人参的PCR专用引物。本发明所要解决的第二个技术问题是：提供一种用于特异性鉴别中国黄果人参的常规PCR方法；本发明所要解决的第三个技术问题是：提供一种用于特异性鉴别中国黄果人参的荧光定量PCR方法。

本发明所提供的用于于特异性鉴别黄果人参的PCR专用引物，包括1条正向引物HgF(序列表中SEQ ID No：1)，1条反向引物HgR(序列表中SEQ ID No：2)。

黄果人参叶绿体ccsA基因的序列如序列表中SEQ ID No：3所示，其他人参品种的叶绿体ccsA基因的序列如序列表中SEQ ID No：4所示。

黄果人参叶绿体ccsA基因序列在第635bp处的碱基为G，而其它人参品种在该位置的碱基为A，如图1所示，用于特异性鉴别黄果人参的PCR专用引物HgR就是根据黄果在第635bp处的SNP位点设计的。上述黄果人参专用引物序列的衍生序列也属于本发明。所述衍生序列是指在本发明引物的基础上，在序列的5’端和/或3’端再添加、减少一个或多个碱基得到的序列。