[发明专利]预防乙型肝炎病毒引发肝癌的方法

说明书

本发明涉及一种预防发病的方法，公开了一种预防乙型肝炎病毒引发肝癌的方法，具体步骤包括：外培养HBV感染阳性肝癌细胞和HBV感染阴性肝癌细胞，并分离两种细胞中的外泌体，采用qRT‑PCR检测外泌体中miR‑142‑3p的表达水平；培养HBV感染阳性肝癌细胞，并将培养上清与外周血T淋巴细胞进行共培养，采用qRT‑PCR检测miR‑142‑3p的表达情况；将T淋巴细胞与HBV感染阳性肝癌细胞进行共培养，然后将细胞进行分组处理。本发明的实验方案得出HBV感染阳性肝癌细胞外泌体对肝癌的发生发展产生影响，因而可以根据该方法得到的结论合理预防乙型肝炎病毒引发肝癌。

技术领域

本发明涉及一种预防发病的方法，尤其涉及了一种预防乙型肝炎病毒引发肝癌的方法。

背景技术

肝癌是一种常见的恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类，原发性肝癌起源于肝脏上皮或间叶组织；继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。无论是新生病例的产生还是死亡人数，发展中国家罹患肝癌的人数都要远远多于发达国家，且在全球范围内男性的发病人数和死亡人数均多于女性。

虽然医学技术在不断进步，然而我国肝癌的早期诊断率仅为20％左右，肝癌患者治疗后5年生存率不足10％。与此同时，在发展中国家肝癌的预后效果更差。肝癌发病是一个多因素、多步骤的复杂过程。过度饮酒、长期暴露于致癌物和一些代谢类疾病等环境中都可能诱发肝癌的发生。

同时研究证实，乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)是导致肝癌发生的主要病原体，HBV感染引起的肝癌占所有肝癌病例的80％左右。HBV感染是全球性的公共卫生问题，在我国，每十个人当中就有一个乙肝病毒携带者。研究表明，我国目前的乙肝病毒携带者发病率在5％-10％，对于慢乙肝病毒携带者来说如何做到预防乙肝发病是非常重要的。

发明内容

本发明针对现有技术中关于乙肝发病存在的问题，提供了一种预防乙型肝炎病毒引发肝癌的方法。

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决：

预防乙型肝炎病毒引发肝癌的方法，其包括以下步骤：

步骤一、体外培养HBV感染阳性肝癌细胞和HBV感染阴性肝癌细胞，并分离两种细胞中的外泌体，采用qRT-PCR检测外泌体中miR-142-3p的表达水平；

步骤二、培养HBV感染阳性肝癌细胞，并将培养上清与外周血T淋巴细胞进行共培养，采用qRT-PCR检测miR-142-3p的表达情况；

步骤三、将T淋巴细胞与HBV感染阳性肝癌细胞进行共培养，然后将细胞进行分组处理，分别为：

A组：HBV感染阳性肝癌细胞外泌体中转染miR-142-3p mimic；

B组：HBV感染阳性肝癌细胞外泌体中转染miR-142-3p mimic，并添加铁死亡抑制剂；

C组：HBV感染阳性肝癌细胞外泌体中转染miR-142-3p mimic，并添加凋亡抑制剂；

D组：HBV感染阳性肝癌细胞外泌体中转染miR-142-3p mimic，并添加坏死性凋亡抑制剂；

E组：HBV感染阳性肝癌细胞外泌体中转染miR-142-3p mimic，并添加pcDNA3.1-SLC3A2。

作为优选，采用CCK-8和克隆形成实验检测T淋巴细胞增殖活力。采用活性氧检测试剂盒检测T淋巴细胞内ROS含量。采用GSH试剂盒检测GSH摄入量。

作为优选，采用MDA试剂盒检测MDA的含量。采用铁离子试剂盒检测铁离子表达情况。采用qRT-PCR检测miR-142-3p的表达情况。采用Western blotting检测SLC3A2的表达情况。