[发明专利]一种小鼠子宫内膜损伤模型的构建方法及构建得到的模型

说明书

本发明属于动物实验模型构建技术领域，具体涉及一种小鼠子宫内膜损伤模型的构建方法及构建得到的模型。该子宫内膜损伤模型的构造方法是非创伤性的，包括下述步骤：对小鼠进行呼吸麻醉诱导，麻醉诱导成功后肌肉注射间苯三酚，使用小鼠灌胃针从小鼠阴道进入，探查宫颈松弛后进入子宫角，注射95％乙醇并停留特定时间，之后除去残留乙醇。小鼠子宫内膜损伤模型的构建方法不会通过剖腹的方式对小鼠子宫局部肌层造成损伤，造模效果稳定且成功率高。

技术领域

本发明属于动物实验模型构建技术领域，具体涉及一种小鼠子宫内膜损伤模型的构建方法及构建得到的模型。

背景技术

薄型子宫内膜和宫腔粘连是子宫内膜损伤的常见病症，对女性健康造成极大威胁且会造成妊娠失败。妊娠早期的扩张刮除术是造成薄型子宫/宫颈粘连的常见原因。当前主要通过建立子宫内膜损伤模型的方法来对宫腔粘连/薄型子宫内膜进行研究。常见的用于构建子宫内膜损伤模型的动物主要有兔子、大鼠和小鼠。但由于小鼠手术操作难度较大，一般选用大鼠构建子宫内膜损伤模型。

现有技术中的子宫内膜损伤大致可分为三种：子宫全层损伤模型、子宫缺血模型和子宫内膜化学损伤模型。

子宫全层损伤模型的制备方法为：SD大鼠术前禁食1晚，10％戊巴比妥钠按5mL/kg腹腔注射麻醉后固定大鼠。剃去下腹部毛发，碘伏棉球消毒。在动物实验中心超净台中于耻骨联合上端2～3cm处挑起外层皮肤，剪刀纵向剪开腹壁皮肤2cm，逐层切开腹层黏膜、肌肉组织，进入腹腔，缓慢挑出大鼠的Y型子宫(双子宫、双宫颈、单阴道，两侧宫角互不相通)，于左侧子宫造模(IUA—L组)，眼科剪于子宫中段正中央纵向剪开子宫壁，尽量全部剪开(大鼠子宫全长3～4cm)，眼科剪沿着子宫内膜慢慢剪，彻底去除子宫内膜全层，手术过程中无菌纱布随时止血，保证视野清晰，深度控制在子宫组织浅肌层至深肌层，以确保子宫浆膜面的完整性。子宫内膜切除完成后，7-0显微无菌手术缝线间断缝合子宫，清除血液，右侧子宫作自身对照(IUA-R组)。Sham假手术组左侧子宫(Sham—L组)仅切开再缝合，右侧子宫(Sham—R组)不做处理。手术完成后，将子宫还纳至腹腔，清洗腹腔，4-0手术缝线关腹。7天和28天后分别处死各组大鼠，子宫取样，4％多聚甲醛固定组织，48h内石蜡包埋、切片。该造模方法可以使子宫全层损伤的子宫内膜薄弱，但仅手术区域的子宫内膜偏薄，与临床上人的子宫内膜整体偏薄的情况不同，此造模方法将局部子宫内膜及肌层同时损伤，很难做到大鼠整体的内膜偏薄。

子宫缺血模型的具体造模方法为：麻醉大鼠后，开腹暴露子宫，结扎双侧子宫角动脉，术后3个月，于发情期处死大鼠取子宫组织，发现SD大鼠子宫内膜缺血过后，子宫内膜变薄，腺体减少，腺上皮细胞受损。该造模方法成模时间长且大鼠的老龄化也会对实验造成影响。

子宫内膜化学损伤模型是通过采用95％乙醇对大鼠子宫内膜进行化学损伤，主要利用无水乙醇对组织、细胞的脱水作用，以及可使蛋白质变性的特点。文献《乙醇作用时间对大鼠子宫内膜损伤的影响》(南楠等，《生殖医学杂志》，2019年1月第28卷第1期，P66-10)公开的造模方法为：用10％水合氯醛溶液对大鼠进行麻醉，注射剂量为3mL/Kg，麻醉后放入无菌手术台，仰卧，消毒后腹部阴道口向上1cm左右进行开口，轻轻夹出V型子宫，用动脉夹夹住子宫近阴道端，用注射器分别向子宫推入300-500微升95％乙醇，使子宫保持充盈状态。左右结束后将95％乙醇吸出，并用生理盐水洗涤子宫腔3遍，将子宫塞回，缝合伤口并消毒放回。

上述3种造模方法均需通过开腹的方式来构建宫腔粘连/薄型子宫内膜平台，操作复杂，且造模效果不稳定，与临床常见原因的子宫内膜损伤特点存在差异，有待进一步改进。

发明内容

发明人在研究中发现：现有技术通过开腹方式建造模型，必须经子宫外侧浆膜层及肌层进入，会造成子宫局部全层的损伤，与临床常见原因造成IUA的损伤特点存在差异。本构建方法采用小鼠作为模型动物，通过微创的方式保留子宫全层结构，经宫颈乙醇灌注法构建得到宫腔粘连模型。