[发明专利]用于微滴式数字PCR仪的计数校准装置、制备及使用方法

权利要求书

1.一种用于微滴式数字PCR仪的计数校准装置，其特征在于：包括腔体1、腔体2、腔体3、腔体4；所述腔体1至腔体4中放置有聚甲基丙烯酸甲酯薄片，聚甲基丙烯酸甲酯薄片内封闭有固定数量的不同颜色荧光标记的微球；其中，

所述腔体1至腔体4为单层封闭式腔体，腔体高度为90微米～130微米；所述腔体1内放置的以聚甲基丙烯酸甲酯为载体的薄片内封闭有FITC标记的基底微球30000个；腔体2内放置的以聚甲基丙烯酸甲酯为载体的薄片内封闭有FITC标记的基底微球27000个、蓝色荧光标记的微球1000个、绿色荧光标记的微球1000个、红色荧光标记的微球1000个；腔体3内放置的以聚甲基丙烯酸甲酯为载体的薄片内封闭有FITC标记的基底微球24000个、蓝色荧光标记的微球2000个、绿色荧光标记的微球2000个、红色荧光标记的微球2000个；腔体4内放置的以聚甲基丙烯酸甲酯为载体的薄片内封闭有FITC标记的基底微球18000个、蓝色荧光标记的微球4000个、绿色荧光标记的微球4000个、红色荧光标记的微球4000个；

所述FITC标记的基底微球、蓝色荧光标记的微球、绿色荧光标记的微球、红色荧光标记的微球的直径为80微米～120微米；标记有不同颜色荧光的微球在聚甲基丙烯酸甲酯薄片中呈单层排列。

2.根据权利要求1所述的一种用于微滴式数字PCR仪的计数校准装置，其特征在于，所述计数校准装置的使用方法，包括以下步骤：

（1）将腔体高度分别为90微米～130微米的微滴式数字PCR仪的计数校准装置分别放置于数字PCR仪器内，激发光源激发后，发出的荧光被图像传感器收集成像；

（2）使直径为80微米～120微米的不同颜色荧光标记的微球在图像传感器的表面分别成像；

（3）通过计算机进行数据采集后，微滴式数字PCR仪的计数校准装置的腔体1至腔体4中已知的固定数量并标记不同颜色荧光微球进行数量的比对分析；

（4）分析比对结果，对仪器的计数系统进行校准并形成校准文件；

（5）进行样本的数字PCR检测后，首先引入校准文件对计数系统进行校准后，再对发出荧光的微滴进行计数并完成后续的数据分析工作。