[发明专利]一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法

权利要求书

1.一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、提取充质干细胞，利用血液中提取的成体充质干细胞进行无血清培养；

步骤二、培育充质干细胞，将提取的充质干细胞放入无血清培养基中培养，并在培养基中加入血清普代物，L-谷氮酸酰胺，脱氧核糖核昔，FGF和TGF-B；

其中，无血清培养基中血清曾代物的体积分数为15-20％，L-谷気酸酰胺的浓度为280-300ng/mol，脱氧核糖核昔的浓度为l0-20ng/mol，成纤维细胞生长因子的浓度为15-25ng/mol，转化生长因子・B的浓度为15-25ng/mol，维生素B5的浓度为3-5ng/mol，维生素B12的浓度为0.02ng/mol；

步骤三、制作干细胞外泌体冻干粉，收集培养基中的上清液，将迷迭香，肉桂，无光敏葡萄柚捣碎并用茉莉花浸泡过的无菌水浸泡，然后将其液体与上清液和维生素C和维生素E混合，釆用0.2-0. 22md的无菌过滤器对收集得到的混合液进行过滤，然后经过浓缩、冷冻干燥后，制得干细胞外泌体冻干粉紧致制剂；

步骤四、皮肤紧致功效实验，进行小鼠皮肤紧致功效的实验，将外泌体冻干粉紧致制剂敷在表皮层或采用微针、滚针或水光针中任一种方式将外泌体导入表皮深层和真皮层；

其中，在进行小鼠皮肤紧致功效实验时，同时进行空白实验组进行实验；

步骤五、数据统计分析，分别统计皮肤紧致功效实验组与空白实验组的小鼠皮肤紧致变化程度以及时间，并进行对比分析。

2.根据权利要求1所述的一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法，其特征在于：所述步骤一中，在提取充质干细胞时，利用输送泵通过导入管将储液箱中的待分离液吸出，经过滤网过滤留下所需的MSC液体，流出到培养基上，且培养套设置多个空腔能够用于容纳培养基。

3.根据权利要求1所述的一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法，其特征在于：所述步骤二中，充质干细胞培养的氧浓度为2-3%，温度为37C・二氧化碳浓度为5%。

4.根据权利要求1所述的一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法，其特征在于：所述步骤二中，所使用的无血清培养基以alpha-MEM培养基为基础培养基，添加血清替代物、L-谷氨酸酰胺、脱氧核糖核昔、成纤維细胞生长因子和转化生长因子-8。

5.根据权利要求1所述的一种采用干细胞外泌体对皮肤紧致功效的研究方法，其特征在于：所述步骤三中，迷迭香，肉桂，无光敏葡萄柚捣碎充分与茉莉花浸泡的无菌水和维生素接触，其混合液体温度为37℃-40℃，并在高压的环境下浸泡时长为12小时且维生素C的浓度为30-50ng/mol，维生素E的浓度为0.3-0.5ng/mol。