[发明专利]牛支原体分泌蛋白MbovP0145及其应用

说明书

本发明公开了一种牛支原体Mbov_0145基因编码的蛋白，所述牛支原体Mbov_0145基因具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，本发明还公开了其抗体，以及所述蛋白和抗体在制备牛支原体检测试剂盒中的应用，属于动物传染病防治技术领域。该蛋白能与牛支原体毒力株M.bovis HB0801自然感染和人工感染牛阳性血清发生特异性反应，可以鉴别疫苗免疫后发生野毒感染的动物。可望作为牛支原体感染的诊断试剂、疫苗和药物研发的分子靶标，在牛支原体防控中发挥重要作用。

技术领域

本发明属于动物传染病防治技术领域，具体涉及到一种牛支原体分泌蛋白MbovP0145、其抗体，以及所述蛋白和抗体在制备牛支原体检测试剂盒中的应用。

背景技术

牛支原体是致牛呼吸道疾病综合征的重要病原，常在运输应激后爆发，引起牛肺炎、乳腺炎，并继发关节炎、流产和不孕等病症，是当今危害世界养牛业的重要常发传染病之一。随着牛业国内国际贸易的迅速发展，牛支原体病已呈全球范围传播的趋势。我国于2008年首次报道肉牛爆发牛支原体肺炎，发病率为80％以上，病死率10％以上，可高达40％。此后全国多个省市和地区的肉牛和奶牛不断爆发牛支原体肺炎，目前已成广泛流行状态，严重危害我国肉牛和奶牛业的发展。由于支原体无细胞壁，对青霉素类药物先天性耐药，再加上其它抗生素耐药性的增加，给临床治疗带来严重的影响。并且尚无疫苗用于牛支原体病的有效预防。因此，早诊断早治疗是当前唯一可靠的控制方法。

当前用于诊断牛支原体病的金标准是病原分离，此方法耗时耗力且需要配置专业实验室以及专业人员，不适用于临床批量、快速和早期检测。此外培养物的PCR检测方法依然存在假阳性过高、易污染等问题。综合起来，ELISA方法仍然是一种敏感性高、特异性强且可在短时间内检测大量样品的诊断技术。建立优秀的ELISA抗原或抗体诊断方法的关键是筛选有效的牛支原体诊断靶标。同时，免疫原性良好的靶标分子也是新型疫苗研发的侯选靶标。

分泌蛋白一般是病原菌的毒素、黏附素和决定毒力的酶，参与细菌黏附、侵袭、增殖以及抑制宿主防御机制等过程，是细菌之间、细菌与宿主间交流的重要分子，也是近年来寻找诊断、疫苗和药物靶标的重要结构。本发明发现牛支原体一个分泌脂蛋白MbovP0145，由Mbov_0145基因编码。在大肠杆菌表达的重组蛋白rMbovP0145能够与牛支原体毒力株M.bovis HB0801自然感染和人工感染牛的血清发生特异性反应，但不与其弱毒力菌株M.bovis HB0801-150感染牛的血清发生免疫反应。因此，该蛋白是一种抗原性蛋白，且可能与毒力相关，可望成为牛支原体新型血清学诊断试剂、疫苗和药物的潜在靶标，对牛支原体病的防控具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一个牛支原体免疫原性分泌蛋白MbovP0145，该蛋白由Mbov_0145基因编码，可望用于诊断、疫苗和药物的潜在靶标，在牛支原体防控领域中具有很好的应用前景。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

申请人于2008年6月从病牛的病变肺组织中分离得到一株牛支原体HB0801，命名为牛支原体HB0801，Mycoplasma bovis HB0801，该毒株为牛支原体强毒分离株。

从牛支原体HB0801的分泌蛋白组中，发现了一个未知功能的分泌蛋白MbovP0145，该蛋白由Mbov_0145基因编码，核苷酸序列见序列表SEQ ID NO:1，长度为1446bp。为了证明Mbov_0145基因及其蛋白的功能，本发明以牛支原体HB0801基因组Mbov_0145基因为模板，根据大肠杆菌对密码子偏爱性进行密码子修饰，将牛支原体中色氨酸密码子UGA突变成大肠杆菌中的色氨酸密码子UGG，修饰后的Mbov_0145基因核苷酸是序列表SEQ ID NO:2的1-1446位碱基所示的序列，其长度为1446bp，送商业化公司人工合成。牛支原体Mbov_0145基因编码的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示，共编码481个氨基酸残基。