[发明专利]S-腺苷同型半胱氨酸人工完全抗原、制备方法及其应用

说明书

本发明提供了一种S‑腺苷同型半胱氨酸人工完全抗原的制备方法，包括以下步骤：将S‑腺苷同型半胱氨酸与二碳酸二叔丁基酯混合，得到一第一中间体，所述二碳酸二叔丁基酯用于保护S‑腺苷同型半胱氨酸中的抗原表位；将载体蛋白加入到所述第一中间体中，反应后得到一第二中间体；以及去除所述第二中间体中的所述二碳酸二叔丁基酯，从而得到所述S‑腺苷同型半胱氨酸人工完全抗原。该方法制备出的S‑腺苷同型半胱氨酸人工完全抗原具有较高特异性、选择性和免疫原性。本发明还提供一种该方法制备的S‑腺苷同型半胱氨酸人工完全抗原以及该S‑腺苷同型半胱氨酸人工完全抗原在抗体制备上的应用。

技术领域

本发明涉及有机化学及免疫学技术领域，尤其涉及一种S-腺苷同型半胱氨酸人工完全抗原、制备方法及其应用。

背景技术

在生物体内，活化的甲基化物S-腺苷甲硫氨酸(S-Adenosyl-L-methionine,SAM)由酶催化将甲基转移到各类蛋白质或者核酸分子上，从而形成对应的甲基化产物称为生物的甲基化。脱去甲基的SAM生成S-腺苷同型半胱氨酸(S-Adenosyl-L-homocysteine,SAH)，再经过进一步水解后脱去腺苷产生同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)该过程为目前已知脊椎动物产生Hcy的唯一途径。

甲基化是生物体普遍存在的重要生化反应，与基因的调控、机体代谢、衰老、疾病、激素等生命过程密切相关，且其量化指标也是阿尔茨海默症(AD)、关节炎、帕金森病(PD)、系统性红斑狼疮、肿瘤乃至抑郁症和精神分裂等多种疾病的重要生理指标。同时，高血Hcy含量更作为心脑血管发病的独立危险因子在临床医学上有重要意义。因此实现对SAH和Hcy的快速简便且精准的检测，有着重要科学价值和广阔的市场前景。传统的检测方法主要有高效液相色谱(HPLC)、质谱法、电化学法、荧光偏振法(FPIA)、毛细管电泳法等，而这些方法费时费力、成本高昂、严重依赖各类大型设备和具备专业技能的操作人员。循环酶法虽然相对简便，但反应繁琐程序复杂并且无法实现对目标分子的瞬时直接检测，更难以开发快速检测试剂。

然而，SAH为小分子物质，属于半抗原，自身无免疫原性，无法直接免疫动物获取对应抗体，需要与合适的载体蛋白耦联后才能制备同时具有免疫原性和免疫反应性的完全抗原。理论上，半抗原为单价抗原，即：分子上只有一个抗原表位。因此要想获得高效和特异性的抗体就必须在连接载体蛋白时保护好关键抗原表位，并将其完全暴露于载体表面，只有这样才能让B细胞的BCR受体识别并得到充分刺激。当小分子有羧基时，通常用酰胺化试剂将之与载体表面氨基缩合连接到载体蛋白表面。虽然该方法副产物少，效率高，但前提是用于耦联的羧基不是抗原的表位。在SAH分子可以看成是Hcy分子与腺苷通过-S-C-键结合，分子中有唯一一个羧基位于同型半胱氨酸部分，而该羧基为抗原表位的关键基团，如要获得可以对SAH分子和Hcy分子都能同时响应的抗体，Hcy端的任何基团都要原封不动完好无损。倘若直接用于连接载体势必会大大影响到合成抗原的免疫特异性，以及后续产生抗体的特异性。然而现仅有的少数SAH和Hcy单抗的制备研究中均忽略了这一关键问题，缺乏基于SAH分子结构的优化合理的抗原制备工艺，不能稳定生产优质高效的SAH抗原和抗体。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种S-腺苷同型半胱氨酸人工完全抗原的制备方法，该方法可有效避免抗原表位在后续制备的过程中被反应而破坏。

另，还有必要提供一种上述S-腺苷同型半胱氨酸人工完全抗原的制备方法制备的S-腺苷同型半胱氨酸人工完全抗原。

另，还有必要提供一种上述S-腺苷同型半胱氨酸人工完全抗原在抗体制备上的应用。

本发明提供一种S-腺苷同型半胱氨酸人工完全抗原的制备方法，包括以下步骤：

将S-腺苷同型半胱氨酸与二碳酸二叔丁基酯混合，得到一第一中间体，所述二碳酸二叔丁基酯用于保护S-腺苷同型半胱氨酸中的抗原表位；

将载体蛋白加入到所述第一中间体中，反应后得到一第二中间体；以及