[发明专利]一种核酸提取试纸条及其使用方法

说明书

本发明提供了一种核酸提取试纸条及其使用方法，属于分子生物学检测技术领域；所述核酸提取试纸条包括手持区和核酸结合区；所述核酸提取试纸条以带有不干胶薄膜的PVC底板为主体；PVC底板的一端粘附有纤维素滤纸，为核酸结合区；PVC底板上未粘附纤维素滤纸的区域为手持区(疏水端)。本发明的核酸提取试纸条结构简单，使用过程中不需要复杂仪器。利用本发明的核酸提取试纸条能在25～50s内对生物样本中的核酸进行快速提取纯化，并基于该核酸提取试纸条，运用PCR、LAMP扩增技术对生物样品进行快速的分子检测技术。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，尤其涉及一种核酸提取试纸条及 其使用方法。

背景技术

生物样本的分子检测，一般先提取生物样本中的基因组，然后根据所需 检测的目的基因设计上下游引物并利用PCR技术扩增目的基因。PCR检测 首先需要提取样本中的DNA。目前实验室常用的DNA提取方法包括TPS 提取法、CTAB提取法以及SDS提取法等。以上DNA提取方法需要用到水 浴锅、离心机、移液器等实验设备以及氯仿、异丙醇、乙醇等有机试剂。提 取过程操作繁琐，难度系数较高，耗时较长；同时，有机试剂会对操作者的 身体健康造成危害。目前需要一种操作简便、提取时间短的核酸提取方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种核酸提取试纸条及其使用方法，利用本发明 的核酸提取试纸条，提取时间短且操作简便。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种核酸提取试纸条，包括手持区和核酸结合区；所述核 酸提取试纸条以带有不干胶薄膜的PVC底板为主体；PVC底板的一端粘附 有纤维素滤纸，为核酸结合区；PVC底板上未粘附纤维素滤纸的区域为手持 区。

优选的，所述PVC底板的长×宽为：42～46mm×2mm；所述纤维素滤纸 的长×宽为：3.8～4.2mm×2mm。

本发明提供了上述方案所述核酸提取试纸条的使用方法，包括以下步 骤：

1)将生物样品加入到核酸提取液中，得到混合液，对所述混合液研磨 8～15s，得到核酸粗提液；

2)将上述方案所述核酸提取试纸条的核酸结合区浸入到步骤1)所述核 酸粗提液中8～15s，得到第一试纸条；

3)将步骤2)所述第一试纸条浸入到洗脱液中3～8s，得到第二试纸条；

4)将步骤3)所述第二试纸条浸入到扩增体系中3～8s，释放提取到的 核酸，得到完整扩增体系，进行扩增反应；所述扩增体系中缺少扩增模板。

优选的，步骤1)中所述核酸提取液包括以下摩尔浓度的组分：Tris 90～110mM、KCl0.8～1.2M和EDTA8～12mM；所述核酸提取液的pH值为 7.8～8.2。

优选的，步骤1)中所述生物样品的质量和核酸提取液的体积的比例为 20mg：300μL。

优选的，步骤3)中所述洗脱液包括以下浓度的组分：Tris9～11mM和 体积百分含量为0.05％～0.15％的Tween-20。

优选的，步骤4)中所述扩增体系包括PCR扩增体系或LAMP扩增体 系。

优选的，缺少扩增模板的LAMP扩增体系以24μL计，包括以下组分： 2×HNB LAMPMix 12.5μL，10×LAMP Primer Mix 2.5μL，5M Betain 3μL， Bst2.0DNA Polymerase 1μL和ddH₂O 4μL；扩增程序为：65℃，1h。