[发明专利]阿胶在用于缓解细胞氧化应激损伤产品中的应用

说明书

本发明提供了一种阿胶在用于缓解细胞氧化应激损伤产品中的应用，涉及生物制药技术领域。将阿胶用于制备可以调控培养对象基因表达的产品，可调控基因包括氧化应激损伤修复和应激反应相关的基因。将阿胶应用于培养物中可以缓解氧化应激损伤对培养对象基因表达水平的改变。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，尤其是涉及一种阿胶在用于缓解细胞氧化应激损伤产品中的应用。

背景技术

阿胶是一味传统中药，在中国具有两千多年的食用历史，它是由黑驴皮熬制而成，主要成分为胶原蛋白降解产物，还含有多肽、多糖、酮类、杂环化合物和无机元素等。阿胶在2000多年的食用过程中，广泛被用于补血止血，促进造血；扩张血管，改善微循环；抗疲劳，延缓衰老；提高人体免疫力等。然而，上述疾病的发病机制与氧化应激损伤相关。到目前为止，未见阿胶抗氧化应激及调节相关基因表达产品的发明。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明第一目的在于提供阿胶在制备用于调控培养对象基因表达组合物中的应用，该组合物可以缓解氧化应激对培养对象基因表达水平的改变。

本发明第二目的在于提供阿胶或上述用于调控培养对象基因表达组合物在制备缓解细胞氧化应激损伤产品中的应用。

为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：

根据本发明的一个方面，本发明提供了阿胶在制备用于调控培养对象基因表达组合物中的应用，所述组合物用于调控培养对象基因的表达水平；所述基因包括氧化应激损伤修复和应激反应相关的基因。为了方便描述，“用于调控培养对象基因表达的组合物”在下文中也表述为“组合物”或“阿胶基因调控组合物”。

本发明通过实验发现，利用双氧水诱导小鼠成纤维细胞(MEF)发生氧化应激损伤时，在培养基中添加阿胶，提取对照组，损伤组，及阿胶实验组中MEF细胞的mRNA进行RNASeq基因表达分析后，发现含有阿胶的培养基能够调控小鼠成纤维细胞基因的表达，尤其是调控经氧化应激损伤后表达量发生变化的基因。当MEF细胞受氧化损伤后，阿胶的处理能调节一部分基因对氧化应激损伤进行修复，以及调节由氧化损伤导致相关基因表达量的变化，即培养物中的阿胶降低了MEF细胞在氧化应激压力下大部分上调和/或下调基因表达量的改变程度。

本发明中，RNAseq测序及数据分析方法如下：

转录组测序参考图10所示流程图，具体方法如下：提取样品总RNA并使用DNase消化DNA后，用带有oligo(dT)的磁珠富集MEF细胞mRNA；加入打断试剂将mRNA打断成短片段，以打断后的mRNA为模板，用六碱基随机引物合成第一条cDNA链，然后配制第二链合成反应体系合成第二条cDNA链，并使用试剂盒纯化双链cDNA；纯化的双链cDNA进行末端修复、加A尾并连接测序接头，然后进行片段大小选择，最后进行PCR扩增；构建好的文库用Aglilent2100Bioanalyzer质检合格后，使用Illumina HiSeqXTMTen测序仪进行测序。

基因表达水平分析参考图11所示流程图，具体分析方法如下：

一个基因表达水平的直接体现就是其丰度情况，基因丰度程度越高，则基因表达水平越高。在转录组测序分析中，通过定位到基因组区域或基因外显子区的测序序列(Reads)的计算来估计基因的表达水平。Read计数除了与基因的真实表达水平成正比外，还与基因的长度和测序深度成正相关。

在一些可选的实施例中，培养对象可被调控的基因包括DNA损伤修复基因、细胞周期调控相关基因、促细胞死亡基因和抗细胞死亡基因。