[发明专利]一种去除Taq酶抑制剂的离心管及其使用方法

说明书

本发明公开了一种去除Taq酶抑制剂的离心管及其使用方法，离心管包括外管、上盖、下盖、过滤管和纯化管；本发明将过滤管和纯化管集成于一两侧均可开口的离心管中，内锥管内填充填料，通过两步离心即可对样品完成过滤和纯化，适用范围广，操作简便，并且实验证明本发明有效去除了复杂来源样本中的抑制剂，获得适用于下游基因检测技术的高纯度核酸。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体来说涉及一种去除Taq酶抑制剂的离心管及其使用方法。

背景技术

随着生命科学的不断发展，分子生物学、遗传学等领域的生物技术也取得了长足进步。在基础医学研究以及临床分子诊断过程中，基因检测已经成为一种高效、准确的手段，并广泛地应用于各种病理生理过程的遗传特征分析、分子分型以及临床诊断和治疗中的靶点检测。然而，由于检测所用组织标本来源、组成以及前期保存和处理条件的多样性，使得后续用于基因检测的核酸标本质量常常参差不齐，导致基因检测靶点的检出率、结果的重复性等均受到不同程度的影响，甚至由于核酸样本不合格，导致无法进行基因检测，从而需要重新采集标本，最终给患者带来更多的痛苦甚至延误患者的临床诊断和治疗，因此，一种能够广泛地适用于各种不同组织标本并且高效纯化核酸的技术手段尤为重要。

无论是何种组织细胞来源的核酸，在获得高质量核酸之前都需要对组织细胞进行完全裂解。经典的裂解液中几乎都会包含众多去污剂、金属螯合剂和盐离子，一方面在组织细胞裂解时提供适合的裂解环境，同时保护DNA和RNA分子免受降解。裂解液中所包含的去污剂能够使蛋白质变性，从而促进核酸的游离。为了增加核酸的得率，裂解液中还可以加入蛋白酶，通过消化核酸结合蛋白，从而进一步促进核酸游离。此外，也有直接利用高浓度蛋白质变性剂作为组织细胞裂解液，并主要用于RNA的抽提。然而，由于这些裂解液中促进核酸游离释放的成分均主要作用于蛋白质，而目前对核酸进行检测的技术手段，不论是PCR还是高通量测序，其前期样本准备过程中均涉及逆转录酶和/或DNA聚合酶介导的核酸样本扩增，因此，一旦获得的核酸样本中混杂着蛋白质活性抑制剂，将直接影响后续基因检测的结果。

目前核酸纯化技术主要包含两大类，一类为介质分离，一类为非介质分离。比如1)经典的酚/氯仿抽提纯化技术：细胞裂解后离心分离含核酸的水相，加入等体积的酚：氯仿：异戊醇混合液，离心使得蛋白质被保留于有机相，核酸则位于上层水相，最后通过醇沉淀的方式获得纯化的核酸；2)离子交换介质纯化技术：裂解液中的核酸能够联结在离子交换介质上，通过洗涤除去残留杂质并用高盐缓冲液洗脱核酸。最后，再经过标准醇沉淀方式获得纯化的核酸；3)吸附介质纯化技术：裂解液中的核酸选择性吸附于介质，而后通过洗涤除去杂质并用低盐缓冲液直接洗脱，从而获得纯化的核酸并直接用于后续检测；4)密度梯度离心法：由于不同的核酸及蛋白质具有不同的密度，因而可以通过密度梯度离心的方式实现核酸的纯化。然而，这些核酸纯化方法中仍存在许多影响下游基因检测的问题。比如醇沉淀法耗时长、对于低浓度核酸的沉淀效率低且不适合不大规模抽提。虽然介质纯化法适合大规模核酸纯化，核酸纯度高而且操作更便捷。然而，对于一些复杂样本，由于这些方法均不能对某些抑制剂进行高效的清除，最终无法获得适用于下游基因检测技术的高纯度核酸。因此，对于复杂来源样本中抑制剂的高效去除是核酸纯化过程中的一项重要挑战。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种去除Taq酶抑制剂的离心管及其使用方法。

一种去除Taq酶抑制剂的离心管，包括外管、上盖、下盖、过滤管和纯化管；

所述上盖和下盖分别安装于外管的上下两端，所述外管内壁的中部形成有中部卡环，所述外管上端形成有上部卡环、下端形成有下部卡环，所述过滤管设置于外管内中部卡环的上方，所述纯化管设置于外管内中部卡环的下方；

所述过滤管上端开口，管体底部设置过滤膜，上端沿处形成有用于与上部卡环配合限位的上凸缘；